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Fosmid文库大片段的阳性克隆子筛选和测序问题
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handsome1984
铁虫
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专业: 环境微生物学
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Fosmid文库大片段的阳性克隆子筛选和测序问题
大家好,有人构建过Fosmid大片段约40Kb左右的基因组文库吗?筛选阳性克隆可以用特异性引物PCR筛选吗?另外测序是怎么测呢?是提取质粒DNA直接测?片段太大了,好像测不了啊。
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1楼
2012-10-13 14:31:56
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jl860822
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专业: 生物化学
【答案】应助回帖
引用回帖:
13楼
:
Originally posted by
小白的桥段
at 2012-11-22 10:55:12
再附一张纯化后的DNA图片,从左往有第一个是Lamda Hind3,第二个是1Kb定量marker,第三个是DNA,浓度太高有点跑不动似的,构建文库就是用的这个DNA。
10.29DNA纯化2.5ul.jpg
...
小片段挺多的,但是我看你的这个大片段的分子量挺大的,应该也可以试一下
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14楼
2012-11-22 12:59:22
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药剂缘分天空
新虫
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感谢参与,应助指数 +1
scelab: 应助指数-1, 应助指数 -1.禁止恶意应助
2012-10-13 15:51:27
不管怎样,抢个沙发。。。。。。
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2楼
2012-10-13 15:44:45
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hippo_li
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【答案】应助回帖
感谢参与,应助指数 +1
你所谓的阳性克隆是指什么呢?是指含有你目的基因片段的克隆?如果是,那当然可以用目的基因的特异性引物进行筛选。
这个测序不是用常规引物测序的,要用类似测基因组序列的测序方法,例如鸟枪法或者454等。你跟测序公司联系,他们会告诉你,一般送要测序的克隆的菌液就可以。
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3楼
2012-10-14 19:29:45
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jinpeng_6118
木虫
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专业: 微生物遗传学
【答案】应助回帖
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我就做宏基因组学的,构建过十几个Fosmid文库吧
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(4人)
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人生百态原为海,看破红尘方为岸!
4楼
2012-10-15 18:44:02
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