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david0308

木虫 (正式写手)

[求助] co-IP问题求助

我最近做CO-IP实验，结果IP能够特异性拉下来目的蛋白，但是在CO-IP的位置IgG很脏，也会出现和抗体那边一样的条带！求助是为什么？谢谢各位大侠了！
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哈哈
1楼 2012-10-12 17:47:19
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codexg

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
wizardfan: 金币+2, 鼓励新虫发帖 2012-10-19 02:02:25
首先请问你用的细胞还是组织蛋白。如果是组织蛋白，请放血后在取组织。因为血液中大量IgG会“掠夺”大量的2抗，严重干扰你的实验结果。另一种方法是先加入与一抗同种属的IgG后用珠子洗一遍，再加一抗混合。
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3楼2012-10-18 22:20:42
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lilei4283

新虫 (初入文坛)
感谢参与，应助指数 +1
yqbter: 金币+2, 鼓励新虫发帖！ 2012-10-15 18:01:21
wizardfan: 金币-2, 应助指数-1, 有刷应助的嫌疑 2012-10-19 02:01:20
如果co-IP蛋白在50 kD或者25 kD
并且做immunoblot抗体源性和做IP抗体源性一样
那就可能是抗体IgG的条带
如果你认为co-IP的蛋白是特异性的
那可能是IgG不太干净，你可以用和IP抗体同源性的其他无关抗体做control
例如用myc，flag抗体等等
希望能帮到你
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2楼2012-10-15 16:27:43
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