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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 银染回收
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TloveG

铜虫 (小有名气)

[求助] 银染回收

各位大神帮帮忙啊，聚丙烯酰胺胶银染回收不出来啊，我用了三种方法回收，
1. 加水，不捣碎侵泡过夜
2.加水，捣碎（用研磨棒挤压碎），4度过夜
3.加水，捣碎（用研磨棒挤压碎），然后放入沸水中煮沸10min，缓慢冷却，在放置4度过夜
以上三种方法都回收不出来啊，第一种方法回收PCR没条带，后两种方法回收PCR全弥散，哪位高手给点意见啊，急急急啊
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TloveG

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1楼 2012-10-10 21:40:22
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uneei

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by TloveG at 2012-10-12 22:24:55
我用的是50微升PCR反应体系，takara公司的酶，听说这个酶对模版要求很高啊，buffer 5微升，dNTP 4微升， 引物各1微升，酶1微升，模版 1 微升（2微升也做过，没有条带）。这个反应体系之前也做过，貌似没什么问题， ...

热启动没？高保真酶？
我就用的普通的国货全式金的酶，扩得很好啊，既然你觉得TAKAR的酶要求高，你就换一下酶试试~对了，切胶后扩增用的模板我取的是10微升（50的体系），是有点多~但是我觉得1微升是不是稍微少了点？
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13楼2012-10-14 10:58:31
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beishui

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用PAGE胶袍DNA，是单链DNA，所以跑之前的PCR引物是在一条引物上有磷酸标记的，所以你后面PCR的时候不要有磷酸标记的，另外胶回收是直接在95度水中放置5-10min，之后直接四度离心取上清，拿上清直接去PCR
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TloveG
宠辱不惊，看庭前花开花落；去留无意，望天上云卷云舒。
3楼2012-10-11 10:18:29
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TloveG

铜虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by beishui at 2012-10-11 10:18:29
用PAGE胶袍DNA，是单链DNA，所以跑之前的PCR引物是在一条引物上有磷酸标记的，所以你后面PCR的时候不要有磷酸标记的，另外胶回收是直接在95度水中放置5-10min，之后直接四度离心取上清，拿上清直接去PCR

可我的是双链DNA啊
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4楼2012-10-11 14:00:57
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beishui

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你跑胶之前是怎么处理的呢？
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宠辱不惊，看庭前花开花落；去留无意，望天上云卷云舒。
5楼2012-10-11 14:08:00
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