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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 银染回收
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铜虫 (小有名气)

[求助] 银染回收

各位大神帮帮忙啊，聚丙烯酰胺胶银染回收不出来啊，我用了三种方法回收，
1. 加水，不捣碎侵泡过夜
2.加水，捣碎（用研磨棒挤压碎），4度过夜
3.加水，捣碎（用研磨棒挤压碎），然后放入沸水中煮沸10min，缓慢冷却，在放置4度过夜
以上三种方法都回收不出来啊，第一种方法回收PCR没条带，后两种方法回收PCR全弥散，哪位高手给点意见啊，急急急啊
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1楼 2012-10-10 21:40:22
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铜虫 (小有名气)
没人知道么
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2楼2012-10-11 08:51:23
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beishui

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用PAGE胶袍DNA，是单链DNA，所以跑之前的PCR引物是在一条引物上有磷酸标记的，所以你后面PCR的时候不要有磷酸标记的，另外胶回收是直接在95度水中放置5-10min，之后直接四度离心取上清，拿上清直接去PCR
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宠辱不惊，看庭前花开花落；去留无意，望天上云卷云舒。
3楼2012-10-11 10:18:29
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铜虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by beishui at 2012-10-11 10:18:29
用PAGE胶袍DNA，是单链DNA，所以跑之前的PCR引物是在一条引物上有磷酸标记的，所以你后面PCR的时候不要有磷酸标记的，另外胶回收是直接在95度水中放置5-10min，之后直接四度离心取上清，拿上清直接去PCR

可我的是双链DNA啊
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4楼2012-10-11 14:00:57
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beishui

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你跑胶之前是怎么处理的呢？
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宠辱不惊，看庭前花开花落；去留无意，望天上云卷云舒。
5楼2012-10-11 14:08:00
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铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by beishui at 2012-10-11 14:08:00
你跑胶之前是怎么处理的呢？

PCR产物啊
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6楼2012-10-11 15:03:27
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uneei

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用研磨棒是不是太暴力了点儿？就用墙头捣碎点就好了。
银染切胶下来，要用灭菌水好好洗几次（★），然后加适量灭菌水，离心，60~65℃水浴3H以上（★），离心，做PCR。如果时间来不及放4℃过夜第二天做。打★号的都是很关键的步骤。

祝你实验顺利。
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7楼2012-10-11 16:52:10
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uneei

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
TloveG: 金币+50 2012-10-11 18:14:13
引用回帖:
7楼: Originally posted by uneei at 2012-10-11 16:52:10
用研磨棒是不是太暴力了点儿？就用墙头捣碎点就好了。
银染切胶下来，要用灭菌水好好洗几次（★），然后加适量灭菌水，离心，60~65℃水浴3H以上（★），离心，做PCR。如果时间来不及放4℃过夜第二天做。打★号的都 ...

上面写漏了一点，

银染切胶下来，要用灭菌水好好洗几次（★），然后加适量灭菌水，用灭菌枪头捣碎，离心，60~65℃水浴3H以上（★），离心，做PCR。如果时间来不及放4℃过夜第二天做。打★号的都是很关键的步骤。
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8楼2012-10-11 16:54:12
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铜虫 (小有名气)
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TloveG: 回帖置顶 2012-10-12 14:30:48
引用回帖:
8楼: Originally posted by uneei at 2012-10-11 16:54:12
上面写漏了一点，

银染切胶下来，要用灭菌水好好洗几次（★），然后加适量灭菌水，用灭菌枪头捣碎，离心，60~65℃水浴3H以上（★），离心，做PCR。如果时间来不及放4℃过夜第二天做。打★号的都是很关键的步骤。...

非常感谢，明天试试，希望能做出来呀。
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9楼2012-10-11 18:15:02
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铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by uneei at 2012-10-11 16:54:12
上面写漏了一点，

银染切胶下来，要用灭菌水好好洗几次（★），然后加适量灭菌水，用灭菌枪头捣碎，离心，60~65℃水浴3H以上（★），离心，做PCR。如果时间来不及放4℃过夜第二天做。打★号的都是很关键的步骤。...

为啥还是没有回收成功啊，是不是银离子的原因啊。一个条带都没有
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10楼2012-10-12 14:31:32
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