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uneei

金虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by TloveG at 2012-10-12 14:31:32
为啥还是没有回收成功啊,是不是银离子的原因啊。一个条带都没有...

我做了那么多条带,都是这个方法PCR的啊,不是银离子原因。你用的什么体系,什么引物之类的,说详细点

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11楼2012-10-12 18:43:13
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TloveG

铜虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by uneei at 2012-10-12 18:43:13
我做了那么多条带,都是这个方法PCR的啊,不是银离子原因。你用的什么体系,什么引物之类的,说详细点...

我用的是50微升PCR反应体系,takara公司的酶,听说这个酶对模版要求很高啊,buffer 5微升,dNTP 4微升, 引物各1微升,酶1微升,模版 1 微升(2微升也做过,没有条带)。这个反应体系之前也做过,貌似没什么问题,难道是我人品太弱啦。

PS:真的非常感谢你的热心帮助。真是遇到好人啦。
12楼2012-10-12 22:24:55
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uneei

金虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by TloveG at 2012-10-12 22:24:55
我用的是50微升PCR反应体系,takara公司的酶,听说这个酶对模版要求很高啊,buffer 5微升,dNTP 4微升, 引物各1微升,酶1微升,模版 1 微升(2微升也做过,没有条带)。这个反应体系之前也做过,貌似没什么问题, ...

热启动没?高保真酶?
我就用的普通的国货全式金的酶,扩得很好啊,既然你觉得TAKAR的酶要求高,你就换一下酶试试~对了,切胶后扩增用的模板我取的是10微升(50的体系),是有点多~但是我觉得1微升是不是稍微少了点?
13楼2012-10-14 10:58:31
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TloveG

铜虫 (小有名气)

送鲜花一朵
嗯,那我试试,希望这次能成功,谢谢你啦!
14楼2012-10-14 16:20:32
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小河弯弯07

银虫 (小有名气)

我用你的第一种方法,基本能回收,偶尔回收不成功的,我就拿第一次P的为模板稀释100倍后再P一次,就都有条带了。你试试?
15楼2012-11-20 14:29:32
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TloveG

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by 小河弯弯07 at 2012-11-20 14:29:32
我用你的第一种方法,基本能回收,偶尔回收不成功的,我就拿第一次P的为模板稀释100倍后再P一次,就都有条带了。你试试?

第一次回收不成功是指没有条带吗?
16楼2012-11-20 14:44:16
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小河弯弯07

银虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by TloveG at 2012-11-20 14:44:16
第一次回收不成功是指没有条带吗?...

是的
17楼2012-11-20 14:48:20
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小河弯弯07

银虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by 小河弯弯07 at 2012-11-20 14:48:20
是的...

说错了,我是拿第一次没出条带的PCR产物进行二次PCR,没稀释。之后有条带了才稀释100倍做模板选扩。
18楼2012-11-20 14:56:44
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