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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 买的酶溶液，前后两次酶活不一样，怎么办啊。。
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waiting_yang

铜虫 (初入文坛)

[求助] 买的酶溶液，前后两次酶活不一样，怎么办啊。。

最近实验遇到难题，请教各位虫友：
买的西格玛的甘露糖苷酶，液体的（悬浊液），只有230ul。每次做实验用也就2ul就好了，按照瓶子上的保存方法。2-8度保存，前天打开一次做显色实验，昨天打开酶溶液又重复一次显色实验，发现后一次显色明显变浅。
这是什么原因？
酶活降低？？
还是我的保存不当啊？
为了避免每次打开酶溶液照成酶活降低，该如何分装？又该用什么溶液做稀释呢？
有哪位虫友遇到过相似的情况，求交流。。。谢谢。
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1楼 2012-10-10 10:23:01
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
waiting_yang: 金币+1, ★有帮助 2012-10-10 17:20:28
个人觉得应该是你的操作问题，显色的实验一般要求不要见光，至少不要直射，或者是你加的底物有问题也不好说啊！
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持之以恒、永不放弃！
2楼2012-10-10 12:24:13
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xiaojun542

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
waiting_yang: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-10-10 17:20:57
你可以将酶液分装在小的离心管里保存，每管装酶量正好满足你一次使用，这样可以避免你反复在一个管里取酶液带来的污染，使酶活降低。你两次显色试验显色颜色不一致，可能是由于你操作时存在差异造成的，你回顾一下你的操作，包括显色条件的控制、底物配制等方面。
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3楼2012-10-10 12:57:09
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waiting_yang

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaojun542 at 2012-10-10 12:57:09
你可以将酶液分装在小的离心管里保存，每管装酶量正好满足你一次使用，这样可以避免你反复在一个管里取酶液带来的污染，使酶活降低。你两次显色试验显色颜色不一致，可能是由于你操作时存在差异造成的，你回顾一下你 ...

恩，我也有同感，感觉是再某个过程出现了问题，这个方法也很好，就是2ul怎么分装，分装出来也没办法保存啊？即时用某种溶液稀释这2ul保存，可是也是会降低的。简单的说就是一直没有找到合适的酶稳定剂。尝试用过BSA, ADP ,以及蔗糖等几种糖类的溶液稀释保护。可是三天以后都对显色有影响，不知，你那里可有什么好的建议。
另外，显色试验不是一个人做的，三个人的同时实验，结果作对比是一样的结果，底物加样量用同一加样枪加入，底物为同一溶液。
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4楼2012-10-10 17:16:16
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waiting_yang

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gwd0312 at 2012-10-10 12:24:13
个人觉得应该是你的操作问题，显色的实验一般要求不要见光，至少不要直射，或者是你加的底物有问题也不好说啊！

恩，感觉避光的问题应该不大吧，加样很快，然后就在温箱里15min。光线应该没有太大影响吧，一般日光灯还好吧。谢谢啦。
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5楼2012-10-10 17:18:57
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xiaojun542

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
waiting_yang: 金币+1, ★有帮助 2012-10-11 18:03:29
引用回帖:
4楼: Originally posted by waiting_yang at 2012-10-10 17:16:16
恩，我也有同感，感觉是再某个过程出现了问题，这个方法也很好，就是2ul怎么分装，分装出来也没办法保存啊？即时用某种溶液稀释这2ul保存，可是也是会降低的。简单的说就是一直没有找到合适的酶稳定剂。尝试用过BS ...

是否可以尝试将酶液进行冷冻保存。个人建议不知可行否？
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6楼2012-10-11 09:45:14
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waiting_yang

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by xiaojun542 at 2012-10-11 09:45:14
是否可以尝试将酶液进行冷冻保存。个人建议不知可行否？...

嗯，多谢啦。不过-20度冻存也试过了。使用时反复冻融也是会使酶活降低。就是因为这样，才会在西格玛新买的酶液进行实验，严格按照说明书保存，有过两次酶活不一样， 搞的现在没有方案都不敢反复打开使用了，现在就是这个酶不稳定，产品合不合格都很难说，哎，，
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7楼2012-10-11 18:02:51
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