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1256744926

铁虫 (初入文坛)

[求助] HPLC问题请教

做HPLC 时,流动相如下A0.05%三氟乙酸,B乙腈
       0-40min:A:95%-60%
           40-60min:A: 60%-40%
           60-61min:A: 40%-95% 维持4min
前面都走得好好的,从某一针开始,走到50min的时候,出现一个大峰,然后基线就开始往上漂的厉害,一直到走完。进了很多针,都这样,重新配流动相试过,换柱子试过,都是这种情况。请问是什么原因,以及解决的方法?本人是第一次做HPLC,还请大家帮助,非常非常感谢!
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wm彼岸花

木虫 (正式写手)

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xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-09-29 12:43:11
残留?不过梯度洗脱基线是没有等度稳,建议看下有没有残留吧
2楼2012-09-28 22:11:32
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mxx7456

新虫 (小有名气)

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感谢参与,应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-09-29 12:43:18
是大峰还是大包呢,进行样品过滤或者尝试别的样品做对比,是否还会出现同样的情况
3楼2012-09-29 08:29:22
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1256744926

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by mxx7456 at 2012-09-29 08:29:22
是大峰还是大包呢,进行样品过滤或者尝试别的样品做对比,是否还会出现同样的情况

是大峰,进过不同的样品,标准品,都是一样的情况啊,郁闷啊,不知道怎么回事!
4楼2012-09-29 11:12:22
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1256744926

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wm彼岸花 at 2012-09-28 22:11:32
残留?不过梯度洗脱基线是没有等度稳,建议看下有没有残留吧

什么残留啊,怎么看啊?有了又怎么办啊?
5楼2012-09-29 11:13:46
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szq215216

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


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xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-09-29 12:43:25
最后加一个A 5%, B95%, 冲10min以上,再平衡一下10-15min,去除其他未洗脱的杂质。试试看吧,如果还不行,考虑柱效。
6楼2012-09-29 11:45:21
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wm彼岸花

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 1256744926 at 2012-09-29 11:13:46
什么残留啊,怎么看啊?有了又怎么办啊?...

就是carry over效应,进完一针后,进一针空白,看有没有干扰,有的话可以洗针,用初始流动相比例多冲一会,
7楼2012-09-29 14:06:37
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zw0123456789zw

至尊木虫 (职业作家)

Felix Baumgartner Space Jump

【答案】应助回帖

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你的液相色谱条件是不是需要改进,这样的梯度不是很常见。
8楼2012-09-29 14:44:38
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lidong188

铜虫 (小有名气)


液相的色谱条件可以考虑调整一下,上两种流动相混合比例为50%时,黏度最大,可能造成泵的压力增大,在60%-40%较长时间的梯度洗脱可能造成基线上扬。可以试着减少60-40%梯度洗脱时间看看
9楼2012-12-13 14:28:32
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