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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 微滤膜除菌
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bigapplelove

铜虫 (小有名气)

[求助] 微滤膜除菌

我现在做的是蛋白酶发酵，实验室通过离心除菌，但不适合工业化生产，我们现在是先通过絮凝除菌后再过微滤膜进一步除杂，但是现在出现一种情况是，絮凝之后酶活还很高，但经过微滤膜之后回收的酶不到10%，大都被截留在截流液中，现在不知道该怎莫解决了，请问有谁知道怎么可以解决这一问题，让酶也可以通过微滤膜。
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1楼 2012-09-26 21:22:59
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guoxaing

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
bigapplelove: 金币+6, ★★★很有帮助 2012-10-12 09:33:45
bigapplelove: 回帖置顶 2012-10-12 09:35:39
有两方面原因：1，由于微滤孔径小于蛋白质分子量，大部分蛋白质被截留了。所以有必要测一下截留液的酶活。2.微滤采用运输泵或流速过大导致蛋白质变性失活。至于哪方面自己测下就知道了，有了原因就能解决了。
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提取大师
8楼2012-10-11 14:38:20
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
不明白酶为什么不能通过滤膜？我的样品上HPLC前都是用微膜过滤的，否则要堵塞柱子的。
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bigapplelove
4楼2012-09-29 11:55:24
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wgy2007

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
bigapplelove: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-10-10 08:54:40
如果板框都截留蛋白酶的话用微膜过滤肯定会截留。是否你的料液的pH不合适，有一部分蛋白酶析出而被截留，可以考虑在蛋白酶活力不损失的情况下找到一个最佳的pH，使蛋白酶全部溶于液体中后再过滤。
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6楼2012-10-09 11:41:47
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普通回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
bigapplelove: 金币+1 2012-09-27 08:55:50
没有什么板框过滤的？
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2012-09-27 01:30:45
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bigapplelove

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-09-27 01:30:45
没有什么板框过滤的？

之前做过板框过滤，过滤后酶回收率只有50%，所以现在考虑走微滤
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3楼2012-09-27 08:57:14
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bigapplelove

铜虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-09-29 11:55:24
不明白酶为什么不能通过滤膜？我的样品上HPLC前都是用微膜过滤的，否则要堵塞柱子的。

按道理说，应该可以通过膜的，但是实际上就是行不通，我们也不知道是怎莫回事
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5楼2012-10-09 08:49:14
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bigapplelove

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wgy2007 at 2012-10-09 11:41:47
如果板框都截留蛋白酶的话用微膜过滤肯定会截留。是否你的料液的pH不合适，有一部分蛋白酶析出而被截留，可以考虑在蛋白酶活力不损失的情况下找到一个最佳的pH，使蛋白酶全部溶于液体中后再过滤。

您说的有道理，我可以再试试，刚刚我们又查了些资料说，蛋白酶在静电的作用下容易与膜结合，可以加些电解质（像氯化钠....）,因为我们的发酵液是通过泵输送到膜装置里的，所以可能静电可能也起作用吧，这些方法我们这次都试试，但愿可以，谢谢您的帮助!
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7楼2012-10-10 09:08:18
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bigapplelove

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by guoxaing at 2012-10-11 14:38:20
有两方面原因：1，由于微滤孔径小于蛋白质分子量，大部分蛋白质被截留了。所以有必要测一下截留液的酶活。2.微滤采用运输泵或流速过大导致蛋白质变性失活。至于哪方面自己测下就知道了，有了原因就能解决了。

嗯，您分析的有道理，至于第一条，我们膜孔径是0.8μm，理论上是可以通过100万分子量的蛋白质，而我们的酶分子量是七万五，理论上是可以过得去的，而且我们还测了截流液的酶活，80%的酶在截流液中，怀疑酶在过滤过程中可能与菌体粘附在一起吧。第二条，因为测得截流液中含有80%的酶，所以说明酶在运输的过程中应该还没有变性失活，我们现在想是不是运输泵产生静电的作用。现在正在做实验验证，非常感谢您提出的宝贵意见！望以后常交流。
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9楼2012-10-12 09:33:03
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小花木兰

银虫 (小有名气)
我们用板框就行
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bigapplelove
10楼2012-10-16 12:10:57
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