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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 最近做的菌落pcr，可以做胶回收吗？
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sd3824289

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

应该可以回收的！这个没什么问题！只要保证切胶切得准确就行了！
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坚持，就像流星，即使知道最后的结果，也要勇敢的走到最后！
21楼2012-09-29 10:26:32
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weining1203

新虫 (小有名气)
引用回帖:
21楼: Originally posted by sd3824289 at 2012-09-29 10:26:32
应该可以回收的！这个没什么问题！只要保证切胶切得准确就行了！

谢谢回复，回收了效果还不错
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22楼2012-10-16 19:39:58
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weining1203

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
16楼: Originally posted by sxxuan at 2012-09-27 09:29:48
菌液的背景不纯因为太多杂质了。如果可以的话提取菌的DNA再去做扩增，可能会好一点。在因为两端直接设计酶切位点就可以了。
如果条带那么强，可以直接割胶回收的。如果懒得重新设计引物，可以看看现成的T载体里有没 ...

谢谢  回收效果还不错
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23楼2012-10-16 19:40:29
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weining1203

新虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by ilyzp at 2012-09-27 09:41:03
一般是不用菌落PCR产物做回收的，但是我看你的PCR产物很亮，应该可以做回收，可以拿2%的琼脂糖胶慢慢跑，把条带完全跑开之后割胶回收应该没问题

谢谢 回了效果还不错
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24楼2012-10-16 19:40:45
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weining1203

新虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by chenguestc at 2012-09-27 15:07:50
完全可以切胶回收，无需优化。菌落浓度太高里面含蛋白量高及模板浓度太高容易造成拖尾。

谢谢 回收效果不错
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25楼2012-10-16 19:41:07
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weining1203

新虫 (小有名气)
引用回帖:
20楼: Originally posted by wt3532 at 2012-09-29 09:25:34
可以做回收的，如果引物特异性不高，会出杂带，但是只要目的带出现了就好了，提取基因组DNA不见得能减少多少杂带

谢谢 回收的效果不错
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26楼2012-10-16 19:41:23
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雄鹰飞翔

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

根据你提供的电泳图分析得知：
1）4，5泳道的条带不是很清楚，可以与引物的特异性、退火温度、模板浓度有关
2）1-3泳道的目的条带丰度较高，且与目的片段的大小是一致的，那么你可以将对应菌落摇菌提取质粒DNA做酶切验证就可以啊
结论：可以连接到T载上
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27楼2012-11-15 15:33:52
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半边脸

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

很亮，可以回收的，跑的不错的
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28楼2013-04-29 22:20:40
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lhxbio

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

原则上说当然没有问题，可以用菌落pcr产物回收。但是你会用高保真的酶做菌落pcr吗？应该不会吧？所以通常没有人用菌落pcr的产物做后续反应的。若你用含有质粒的菌做模板，用高保真酶做PCR，PCR的产物当然可以回收。
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29楼2014-08-12 10:49:30
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