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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 样品蛋白组分SDS-PAGE鉴定有多条带，是否适合阴离子柱纯化之
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meihuayi

新虫 (小有名气)

[交流] 样品蛋白组分SDS-PAGE鉴定有多条带，是否适合阴离子柱纯化之

如题
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1楼 2012-09-25 23:27:44
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meihuayi

新虫 (小有名气)
wizardfan: 回帖置顶 2012-09-27 06:07:43
引用回帖:
2楼: Originally posted by once1015 at 2012-09-26 09:48:16
实在太笼统，没办法给建议，希望你能把问题说详细一下。
比如 什么来源蛋白组分，蛋白组分的大概性质等

BL21菌镍柱纯化后的蛋白，咪唑梯度洗脱。40mM除杂带，并且在此咪唑浓度下有目的蛋白洗脱下来，但不多。200mM咪唑将目的蛋白洗脱下来，SDS-PAGE胶鉴定主要为目的蛋白，但杂带也很多。想用阴离子柱再纯化，目的蛋白PI=6.15，阴离子柱PH9.0.不知这个策略是否可行？
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18楼2012-09-26 23:27:32
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meihuayi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gelois at 2012-09-26 10:33:05
你蛋白的PI是多少，还有杂带的分布是怎样，把胶图片发上来看一下。
什么都没有让人怎么讲啊。。。。

怎么发图呢？
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19楼2012-09-26 23:31:39
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meihuayi

新虫 (小有名气)
wizardfan: 回帖置顶 2012-09-27 06:07:58
劳驾高手继续作答 ，谢谢。200mM咪唑梯度最浓的带为目的蛋白。我主要是担心杂带会导致我目的蛋白沉淀在阴离子柱上。此前用阴离子柱纯化就碰见进样目的蛋白远多于洗脱出来的目的蛋白总和这种状况。希望有经验的虫子指点一二，或者告诉我用什么策略拿到较纯的目的蛋白。谢谢

1.jpg

[ Last edited by meihuayi on 2012-9-26 at 23:41 ]
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20楼2012-09-26 23:34:07
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meihuayi

新虫 (小有名气)
200mM咪唑梯度最浓的带为目的蛋白
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21楼2012-09-26 23:34:56
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