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山寨马克思

铜虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量熔解温度

第一次做荧光定量,目的基因程序退火温度54度,结果曲线很好,CT值在22-23左右,做了NTC阴性对照,没有荧光信号,熔解曲线单峰,峰值最低900,多数集中在1100-1300左右,但是熔解曲线的退火温度低于80度,只有77度左右,请问各位大侠这是什么原因造成的呢?这样的话,结果还可靠吗?除了重新设计引物外,还有别的调整方式吗?谢谢各位啊~
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孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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小丹木木: 金币+2, 高手,很久不发言了啊 2012-09-25 14:21:07
描述不能反映所有问题,建议上图
楼主怀疑溶解曲线解链温度过低有可能是引物二聚体吧?可以做个浓度梯度PCR验证一下,不过既然NTC无荧光信号,所以是二聚体的可能性不大。产物Tm值低还能可能是因为你的目的片段较小,不知楼主的目的片段多大呢

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

11楼2012-09-24 22:51:30
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