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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 克隆出问题了，大家帮忙分析下
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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)

[交流] 克隆出问题了，大家帮忙分析下 已有11人参与

这个基因需要做蛋白表达。6月份已经诱导表达出来了，但是菌液忘记保种了。只得重新从头做。但现在克隆出来的片段大小可以，连接转化测序后，片段的顺序却是错的，中间总是少了一段，该是那个环节出问题了呢？PCR扩增就不成功，还是连接转化的问题？重复了两次都是这种情况。该怎么办呢？请大家指点下，谢谢。
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Things change, people grow.
1楼 2012-09-11 10:26:08
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aqingkl

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也是6月份扩出基因了，然后做连接转化，当时转化没有成功，我就生病了 ，我就没有继续做回家休息暑假，等开学现在来了再做pcr，死活p不出来了，都是一样的东西，哎，悲催
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13楼2012-09-13 11:10:35
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dshlove

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你没有留连接好的质粒嘛？
你这种情况就是模板的问题的，不知道你现在用的是什么模板。
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2楼2012-09-11 12:45:29
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here0009

银虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果少一段，我觉得可能是PCR的问题吧，扩出来就那样，可能是splice variation
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Forthemoon
3楼2012-09-11 16:07:56
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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dshlove at 2012-09-11 12:45:29
你没有留连接好的质粒嘛？
你这种情况就是模板的问题的，不知道你现在用的是什么模板。

是7月份提的RNA，然后反转录为cDNA，RNA电泳检测还不错。模板一直放在-20°。
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Things change, people grow.
4楼2012-09-12 16:03:16
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