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luozhen2008

木虫 (正式写手)

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[交流] 转染后细胞污染

向大家求教个问题。
关于转染的，我有一个质粒转染了两次都发生污染，第一次四瓶细胞，污染了三瓶，一起做转染的另一组没有发生污染。
第二次再转，四瓶细胞都污染了，一起转的另一质粒没有污染。
你说这是质粒问题，还是其他问题。
从来没有发生过这等事。
以前质粒在外面抽提的也没有转染后污染的。现在质粒到了无水乙醇沉淀时都是在超净台里面操作的。

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1楼 2012-09-07 12:21:56

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448935271

银虫 (小有名气)

应助: 37 (小学生)
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★
luozhen2008(金币+1): 谢谢参与

你的转染试剂是不是污染了啊，质粒在使用之前最好也用滤膜过滤一下，这样比较安全

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20楼2012-11-09 10:09:25

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shayatou

铁虫 (初入文坛)

应助: 4 (幼儿园)
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帖子: 15
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虫号: 773244

★ ★ ★
luozhen2008(金币+1): 谢谢参与
wizardfan: 金币+2, 鼓励发帖交流。娶到细菌：） 2012-09-08 05:23:46

可能原因是质粒有轻微的污染，第一次污染的是因为你取样的时候取到了细菌，没有污染是因为你没有娶到细菌，一开始污染的比较少，所以会有概率问题。后来放的时间久了，可能是细菌增殖了，所以第二次全部污染。虽然提取质粒是用乙醇沉淀的，但是还会有个别细菌存活下来，这是个概率问题的。我之前遇到过这种情况，可以试一下高速离心质粒，然后取上面的转染。菌体比较重，会沉在EP的底部。还有就是从新沉淀质粒，但要考虑回收率

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2楼2012-09-07 15:03:04

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