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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 转染后细胞污染
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luozhen2008

木虫 (正式写手)

[交流] 转染后细胞污染

向大家求教个问题。
关于转染的，我有一个质粒转染了两次都发生污染，第一次四瓶细胞，污染了三瓶，一起做转染的另一组没有发生污染。
第二次再转，四瓶细胞都污染了，一起转的另一质粒没有污染。
你说这是质粒问题，还是其他问题。
从来没有发生过这等事。
以前质粒在外面抽提的也没有转染后污染的。现在质粒到了无水乙醇沉淀时都是在超净台里面操作的。
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1楼 2012-09-07 12:21:56
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wzqno

金虫 (小有名气)
★ ★
luozhen2008(金币+1): 谢谢参与
silicare: 金币+1, 有点低估了细菌的生命力 2012-09-11 10:04:19
很简单，把质粒现在-80或者液氮冻上一夜，细菌基本死光，然后再做转染，转染液尽量不要加抗生素
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14楼2012-09-10 10:09:27
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shayatou

铁虫 (初入文坛)
★ ★ ★
luozhen2008(金币+1): 谢谢参与
wizardfan: 金币+2, 鼓励发帖交流。娶到细菌：） 2012-09-08 05:23:46
可能原因是质粒有轻微的污染，第一次污染的是因为你取样的时候取到了细菌，没有污染是因为你没有娶到细菌，一开始污染的比较少，所以会有概率问题。后来放的时间久了，可能是细菌增殖了，所以第二次全部污染。虽然提取质粒是用乙醇沉淀的，但是还会有个别细菌存活下来，这是个概率问题的。我之前遇到过这种情况，可以试一下高速离心质粒，然后取上面的转染。菌体比较重，会沉在EP的底部。还有就是从新沉淀质粒，但要考虑回收率
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2楼2012-09-07 15:03:04
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huguangdong

至尊木虫 (职业作家)
★ ★
luozhen2008(金币+1): 谢谢参与
wizardfan: 金币+1, 谢谢分享经验 2012-09-08 05:24:02
很明显，质粒污染很严重了，一般我们在外面提取的质粒做转染也不会污染，你这个质粒如果量大建议重新过一次滤膜就行了。
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3楼2012-09-07 17:00:18
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无疆@行者

银虫 (小有名气)
★ ★
luozhen2008(金币+1): 谢谢参与
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2012-09-08 05:24:17
LZ细胞培养基没有用双抗吗？我一直用的含有双抗的培养基，转染没有问题
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4楼2012-09-08 02:59:02
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