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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by 小科研女dow at 2013-04-30 11:19:40
想问一下 做完就离心去掉上清是么?...

不知道你想知道的是哪一步骤?
11楼2013-04-30 18:00:54
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爨乡主人

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

酵母的阳性转化子需要大量筛选的,表不表达跟你的基因整合在酵母的基因组的位置也有关系,我第一次做的都没有筛出能表达的转化子,重新电转了一批,基本都能筛出来有表达的转化子。
12楼2014-10-27 20:15:18
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sophia-yxh

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by dshlove at 2012-09-06 10:29:05
哦,不好意思,让你困惑了。
就三步哦,DOC是脱氧胆酸盐。我用的是脱氧胆酸钠。
1.1ml上清加0.1ml 0.15%DOC
2.混匀并在室温下放置10min
3.加入50ul 100%TCA,混匀,10,000Xg,5min。
这是TCA的一种变通形式哦, ...

我也在做酵母表达,上清电泳后的条带也不清晰,几乎是没有,我也想用这个方法试一试。
我想知道,是不是在第三步离心后去上清,在沉淀中加入水溶解后,加入loading buffer就可以上样电泳了??谢谢。
我是来学习的!!
13楼2015-02-26 14:54:46
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fengshiyu91

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
13楼: Originally posted by sophia-yxh at 2015-02-26 14:54:46
我也在做酵母表达,上清电泳后的条带也不清晰,几乎是没有,我也想用这个方法试一试。
我想知道,是不是在第三步离心后去上清,在沉淀中加入水溶解后,加入loading buffer就可以上样电泳了??谢谢。...

请问这个方法你尝试有效果吗?蛋白表达出来了吗?
14楼2015-08-20 22:18:45
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