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赖皮狗31350

银虫 (小有名气)

[求助] 流式细胞仪测细胞周期,各个周期峰分不开,只有一个宽峰是什么原因?谢谢指点!!

大家好!我最近在使用“细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒(PI染色测细胞周期)” 经流式细胞仪分析癌细胞周期,在认真按照操作说明的情况下(注,实验大体步骤如下:1、胰酶消化细胞,2、离心收集细胞,3、冷的PBS洗后离心,4、冷的70%乙醇固定12h,5、rna酶+PI染色,6、过400目筛。为什么只出现了单个峰,并且峰很宽?重复了几次,可每次每个样本都是如此。不知道是哪步出错了,请各位高人能予以指点。十分感谢啊!
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赖皮狗31350

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 红舟流星 at 2012-09-03 23:05:21
是不是培养时间太长了?

24h  应该还好吧  参阅的文献上都基本是24h,48h,有的甚至72h
天道酬勤
3楼2012-09-04 08:52:37
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赖皮狗31350

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by jiangmenghu at 2012-09-04 21:37:19
如果是药或者别的什么作用于细胞,现在24h出现这种情况,可能对细胞的各个周期有影响,可以适当调节一下作用时间,减少作用时间,还有没有control组吗,看看control组的情况,如果control组没有问题,是你的产品问题 ...

control组也是单峰  除了没有凋亡外  control和给药组的峰都是单的宽峰  另外 您说细胞的问题  请问能具体说名下么  十分感谢啊
天道酬勤
5楼2012-09-05 16:44:58
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赖皮狗31350

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by jiangmenghu at 2012-09-05 18:33:09
我一般研究的是癌细胞,所以正常癌细胞表现出是4个周期,普通细胞应该没有四个周期,如果对照组也是单峰,是不是你的细胞培养的过程中,状态不是很好?如果细胞状态不好也会影响结果的

我最近也在研究癌细胞 Hela,和 MCF 我昨天才知道 管理我们所的流式细胞仪操是学生不懂细胞周期。请问能告诉我详细的仪器使用步骤么
天道酬勤
7楼2012-09-08 00:13:20
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赖皮狗31350

银虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by jiangmenghu at 2012-09-08 11:49:16
哦,这个是操作的问题了,我以前自己也弄过这个仪器,不过现在已经不动手了,Hela和MCF-7做细胞周期肯定是没有问题的,这两种细胞我都养过,如果你们那边操作人员不懂,建议你自己做好样品以后,可以委托公司测定, ...

好的  谢谢您
天道酬勤
9楼2012-09-09 10:07:20
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