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880110sj

金虫 (正式写手)

[求助] 我的RAW264.7细胞为什么一直分化,实验无法进行啊,非常感谢

本人现在在培养RAW264.7,培养基是DMEM高糖,10%胎牛血清,都是Gibico的,刚开始是贴壁养,用的是细胞刮传代,后来发现细胞严重分化,就改为悬浮培养,但是现在细胞还是会贴壁,然后分化,分化的状态是伸出许多的伪足,这样就直接导致我测试空白组和LPS刺激的模型组之间NO含量没有什么差异,我用的是南京建成的NO试剂盒,目前真的不知道问题出现在哪里了,请各位帮个忙吧,非常感谢!
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880110sj

金虫 (正式写手)

880110sj: 回帖置顶 2012-09-01 09:55:59
拜托养过RAW264.7细胞的同学帮帮忙吧,万分感谢!
2楼2012-09-01 09:55:52
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sntyc

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

这个细胞本身就是贴壁生长  如果你细胞状态确实不好 那么就用最简单的方法 挑选好的细胞克隆慢慢扩增吧
3楼2012-09-07 11:04:14
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jiangchunyong

荣誉版主 (文坛精英)

【答案】应助回帖

我也在养啊 没什么经验 哎 有时候还污染
4楼2012-09-07 11:15:37
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TCMdoctor

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

880110sj: 回帖置顶 2013-09-29 15:27:36
我也在养,也会出现分化的现象。
我们是这么做的,用PBS洗两道,然后加入DMEM培养基,吹打管轻轻吹打,一般状态比较好一点的会被吹打下来,换培养瓶培养这些细胞,一般这样传代三四次细胞状态就调整回来了。
如果还是不行,你重新复苏一支吧
5楼2012-09-20 15:06:49
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qlssys

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

请问你们用的培养基是高糖还是低糖滴,。。DMEM还是1640。。能够指导一下吗??
6楼2012-12-23 22:29:02
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爱知识-圆圆

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

请问你怎么弄成悬浮培养呢?这个细胞贴壁很牢,我们都是用刮刀。时间养久了是会变形,所以要经常冻存细胞,经常复苏新的细胞。
whatever I do,do my best!
7楼2013-04-10 14:27:10
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风中的羽翼_

铜虫 (小有名气)

你确定传代次数过多后悔分化?怎么知道会分化?
8楼2013-06-20 22:54:38
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880110sj

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by TCMdoctor at 2012-09-20 15:06:49
我也在养,也会出现分化的现象。
我们是这么做的,用PBS洗两道,然后加入DMEM培养基,吹打管轻轻吹打,一般状态比较好一点的会被吹打下来,换培养瓶培养这些细胞,一般这样传代三四次细胞状态就调整回来了。
如果 ...

代我女朋友非常感谢你的回复,她现在已经毕业了,谢谢~
9楼2013-09-29 15:28:29
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