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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 质量控制 » 进液相的样品，离心取上清液和0.45um过滤有什么区别
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mxx7456

新虫 (小有名气)

[求助] 进液相的样品，离心取上清液和0.45um过滤有什么区别

HPLC样品配置时，什么时候选择用离心取上清液，什么时候用0.45um滤膜过滤。两者有什么区别？
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1楼 2012-08-27 22:07:19
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

许瑶君

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhychen2008: 金币+2, 应助指数+1, 感谢回帖交流 2012-08-29 23:48:42
zhychen2008: 回帖置顶 2012-08-29 23:48:51
一般情况是采用滤膜过滤的，但是滤膜对有的药物或者辅料吸附作用明显，对于测定结果有明显干扰，此种情况就不适用滤膜过滤，建议采用离心。
你可以同时配置对照品溶液和样品溶液，对照品不过滤，样品过滤，进样观察峰面积有无明显变化，若有变化，不宜采用滤膜过滤，或做滤膜吸附试验，确定该弃除多少毫升的初滤液。
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14楼2012-08-28 16:10:16
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhychen2008: 金币+1, 多谢参与 2012-08-27 22:31:52
离心取上清，用于样品分离纯化，除去有可能影响样品分析的杂质或颗粒。液相时不一定都用到。
滤膜过滤，在进样前使用，理论上，进液相都必须经过微孔滤膜过滤处理，除去小颗粒杂质，防止堵塞色谱柱。
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守候在风中的宁静。
2楼2012-08-27 22:23:07
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lzgxgz

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
痴夷子皮: 金币+1, 多谢参与 2012-08-28 15:31:48
离心取上清，说明肯定有不溶物，进样前也应该过膜。

过膜是保护作用，通常都要过膜。

当不溶物量大，过膜困难，应该先离心。离心不能替代过膜，过膜可替代离心。
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3楼2012-08-28 05:27:29
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cpuliuwei

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

离心其实应该是首选方法，过滤，多一步转移操作，与外部接触的机会大很多，不确定性增加很多。受仪器条件和效率限制，常采取过滤替代，只有一个优点：简单方便，但很多情况下滤膜都不适用的。
1.浓度低的情况下，有滤膜吸附、滤膜溶出液、需要样品量多、不适用于胶质溶液等很多限制，回收率很难保证，做有关物质时，未知杂质会不会被吸附很难验证，
2.难容药物，高浓度下，溶液中会存在很多药物粒子，粒径分散的很，0.45um只能过滤掉以上直径的粒子，高速离心，只要时间够长，理论上粒子应该都会沉降的。
所以有高速离心机和时间的推荐离心吧，用国产膜那就是个杯具。
怕液相堵，加个柱前过滤器或预柱就行了。
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26楼2013-03-18 14:35:58
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普通回帖

1340412959

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
痴夷子皮: 金币+1, 多谢参与 2012-08-28 15:31:55
同意楼上！液相样品进样之前都要过膜的~
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摆正心态~~~冷静冷静再冷静！
4楼2012-08-28 08:51:17
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33088605

铁虫 (正式写手)

general

【答案】应助回帖

★
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痴夷子皮: 金币+1, 多谢参与 2012-08-28 15:32:00
HPLC样品离心的不是很多，离心（高速离心）主要是除去一些干扰因素，在荧光检测的样品中多一点。 过滤只为了出去大颗粒，保护柱子，HPLC很厉害，样品中有点杂质都没事的，但对荧光那就不一样了。
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伟大的人不需要个人签名
5楼2012-08-28 09:55:48
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anyluk

主管区长 (文坛精英)

国家高级公共营养师

优秀区长优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
痴夷子皮: 金币+1, 多谢参与 2012-08-28 15:32:07
区别很大，HPLC是精密仪器，各个部件的滤头都是精密的不能在精密了，所以需要过0.45UM的滤膜，这是分析的常识，流动相都要过，即使肉眼看上去很干净，但是在分析方面上细微的杂质都会导致仪器的不正常反应及测试结果的不准确
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精益求精
6楼2012-08-28 10:05:16
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jwr

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
痴夷子皮: 金币+1, 多谢参与 2012-08-28 15:32:13
严重同意2楼朋友的观点：在进样前使用，理论上，进液相都必须经过微孔滤膜过滤处理，除去小颗粒杂质，防止堵塞色谱柱。
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7楼2012-08-28 10:09:57
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mxx7456

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 33088605 at 2012-08-28 09:55:48
HPLC样品离心的不是很多，离心（高速离心）主要是除去一些干扰因素，在荧光检测的样品中多一点。 过滤只为了出去大颗粒，保护柱子，HPLC很厉害，样品中有点杂质都没事的，但对荧光那就不一样了。

那荧光要求严格的话，是不是离心了还要过滤好呢·
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8楼2012-08-28 12:16:33
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mxx7456

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by anyluk at 2012-08-28 10:05:16
区别很大，HPLC是精密仪器，各个部件的滤头都是精密的不能在精密了，所以需要过0.45UM的滤膜，这是分析的常识，流动相都要过，即使肉眼看上去很干净，但是在分析方面上细微的杂质都会导致仪器的不正常反应及测试结果 ...

取上清液的方法可以进液相吗~
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9楼2012-08-28 12:18:25
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anyluk

主管区长 (文坛精英)

国家高级公共营养师

优秀区长优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by mxx7456 at 2012-08-28 12:18:25
取上清液的方法可以进液相吗~...

不可以，还是要过0,54膜
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精益求精
10楼2012-08-28 13:54:34
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