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weiyasong

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

(一)细菌总DNAD 提取
革兰氏阳性菌DNA提取方法(提取基因组DNA)
1. 3-6ml 细菌过夜培养液, 5000rpm离心10分钟, 弃上清
2. 加0.5ml TE悬浮沉淀,并加75μl 溶菌酶(20mg/ml)溶液,40°C保温30分钟
3. 加50μl, 10% SDS, 5μl 蛋白酶K (20mg/ml),混匀, 37℃保温30分钟
4. 加0.75ml, 5mol/L NaCl, 混匀
5. 用等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提, 5000rpm离心10分钟, 将上清液移至干净离心管
6. 用等体积氯仿:异戊醇(24:1)抽提, 静置10分钟,5000转离心10分钟,转移上清到干净管中。
7. 加2倍体积乙醇沉淀DNA, 颠倒混合, 室温下静止10分钟,离心沉淀DNA
8. 70%乙醇漂洗DNA后, 吸干, 用30-50μl TE溶解DNA, -20℃保存

可以试试,我用的这个方法,感觉挺好使!
11楼2012-08-30 08:54:00
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limin2012

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

胶质物质加无菌水可以溶吗?DNA浓度太大也会吸不出来。
12楼2012-08-30 10:08:17
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jenoscard

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by weiyasong at 2012-08-30 08:54:00
(一)细菌总DNAD 提取
革兰氏阳性菌DNA提取方法(提取基因组DNA)
1. 3-6ml 细菌过夜培养液, 5000rpm离心10分钟, 弃上清
2. 加0.5ml TE悬浮沉淀,并加75μl 溶菌酶(20mg/ml)溶液,40°C保温30分钟
3. 加50μl,  ...

我用的是试剂盒  不过前面应该可以参考下 写啦
13楼2012-08-30 10:38:01
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jenoscard

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
12楼: Originally posted by limin2012 at 2012-08-30 10:08:17
胶质物质加无菌水可以溶吗?DNA浓度太大也会吸不出来。

没试过  就是很大一坨在里面 透明的  也不像DNA
14楼2012-08-30 10:40:01
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limin2012

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你可以试一下。或用乳酸菌特有的引物PCR跑电泳看一下有条带吗?
15楼2012-08-30 12:59:51
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spice

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我加入溶菌酶在55度下20分钟,提出来了,看看加入溶菌酶后可以适当升点温看行否、、、
16楼2012-08-30 13:42:45
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jenoscard

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by ybfang at 2012-08-29 11:22:08
不用挑太多的。一两个菌落足以...

我用的液体培养基呢
17楼2012-09-01 10:17:50
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jenoscard

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
16楼: Originally posted by spice at 2012-08-30 13:42:45
我加入溶菌酶在55度下20分钟,提出来了,看看加入溶菌酶后可以适当升点温看行否、、、

怎么高不会失活哦?
18楼2012-09-01 10:18:55
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spice

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
18楼: Originally posted by jenoscard at 2012-09-01 10:18:55
怎么高不会失活哦?...

根据结果还没有完全失火
19楼2012-09-01 12:49:11
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木森林coco

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
scelab: 金币+5, 鼓励新虫,多多交流哦~ 2012-09-10 12:10:49
我以前也遇到过你说的一坨的问题,确实是菌液量太大了,3-5ml足以。不知道跟你的情况一样不
努力就会有收获
20楼2012-09-09 15:54:36
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