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jenoscard

新虫 (初入文坛)

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专业: 微生物生理与生物化学

[求助] 求助！关于革兰氏阳性菌DNA提取的问题已有3人参与

我现在提革兰氏阳性菌乳酸杆菌的DNA 死活提不出来我用的是溶菌酶37度30分钟不行啊中间就出现胶体物质一坨在里面不知道是什么各位前辈指点一下吧你们用的什么方法

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1楼 2012-08-27 00:38:32

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weiyasong

木虫 (著名写手)

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性别: GG
专业: 兽医免疫学

【答案】应助回帖

（一）细菌总DNAD 提取
革兰氏阳性菌DNA提取方法(提取基因组DNA)
1. 3-6ml 细菌过夜培养液, 5000rpm离心10分钟, 弃上清
2. 加0.5ml TE悬浮沉淀,并加75μl 溶菌酶（20mg/ml）溶液，40°C保温30分钟
3. 加50μl, 10% SDS, 5μl 蛋白酶K （20mg/ml）,混匀, 37℃保温30分钟
4. 加0.75ml, 5mol/L NaCl, 混匀
5. 用等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提, 5000rpm离心10分钟, 将上清液移至干净离心管
6. 用等体积氯仿:异戊醇(24:1)抽提, 静置10分钟，5000转离心10分钟，转移上清到干净管中。
7. 加2倍体积乙醇沉淀DNA, 颠倒混合, 室温下静止10分钟，离心沉淀DNA
8. 70%乙醇漂洗DNA后, 吸干, 用30-50μl TE溶解DNA, -20℃保存

可以试试，我用的这个方法，感觉挺好使！