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求助！关于革兰氏阳性菌DNA提取的问题 已有3人参与
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| 我现在提革兰氏阳性菌 乳酸杆菌的DNA 死活提不出来 我用的是溶菌酶37度30分钟 不行啊 中间就出现胶体物质一坨在里面 不知道是什么 各位前辈 指点一下吧 你们用的什么方法 |
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weiyasong
木虫 (著名写手)
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【答案】应助回帖
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（一）细菌总DNAD 提取 革兰氏阳性菌DNA提取方法(提取基因组DNA) 1. 3-6ml 细菌过夜培养液, 5000rpm离心10分钟, 弃上清 2. 加0.5ml TE悬浮沉淀,并加75μl 溶菌酶（20mg/ml）溶液，40°C保温30分钟 3. 加50μl, 10% SDS, 5μl 蛋白酶K （20mg/ml）,混匀, 37℃保温30分钟 4. 加0.75ml, 5mol/L NaCl, 混匀 5. 用等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提, 5000rpm离心10分钟, 将上清液移至干净离心管 6. 用等体积氯仿:异戊醇(24:1)抽提, 静置10分钟，5000转离心10分钟，转移上清到干净管中。 7. 加2倍体积乙醇沉淀DNA, 颠倒混合, 室温下静止10分钟，离心沉淀DNA 8. 70%乙醇漂洗DNA后, 吸干, 用30-50μl TE溶解DNA, -20℃保存 可以试试，我用的这个方法，感觉挺好使！ |
11楼2012-08-30 08:54:00
eagles123
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2楼2012-08-27 11:40:02
3楼2012-08-27 12:29:53
lly198784
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4楼2012-08-27 12:33:55