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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转化大肠杆菌平板出现卫星菌落是怎么回事？
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linda90

禁虫 (初入文坛)
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1楼2012-08-26 10:02:31
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zwtcchh

新虫 (初入文坛)
估计是载体和目的基因没连上或者是载体本身自连了，卫星菌落出现可能是培养时间过长或者氨苄失效。看一下氨苄有问题没或者就是连接体系有问题，你的目的DNA片段很大，不太好连，再调整下体系。又一次我连的时候13个小时没长菌，后来直到2多个小时才长出三个菌，菌落pcr后有1个是阳性，最终测序也是对的。关键是要连接上和不长杂菌。加油！
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11楼2013-03-01 12:06:26
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sl35537417

木虫 (正式写手)

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amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-08-26 18:19:02
微型菌落是氨苄降解后生长的杂菌  可以将培养时间控制在12h-16h之间  
或者更换抗生素为羧苄青霉素，你的载体是什么？双酶切？估计是连接效率不高？
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2楼2012-08-26 11:03:56
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fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

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★
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小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-27 13:48:02
那个小菌落跟你期望没啥关系，
你知道你那个目的片段的copy的量大概多少，如果太低可以用IPTG增加copy，然后吧培养时间缩短成有梯度的，再看看载体上有别的resistance没有。
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3楼2012-08-26 17:39:43
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linda90

禁虫 (初入文坛)
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4楼2012-08-26 20:43:18
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