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linda90

禁虫 (初入文坛)

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zwtcchh

新虫 (初入文坛)

估计是载体和目的基因没连上或者是载体本身自连了,卫星菌落出现可能是培养时间过长或者氨苄失效。看一下氨苄有问题没或者就是连接体系有问题,你的目的DNA片段很大,不太好连,再调整下体系。又一次我连的时候13个小时没长菌,后来直到2多个小时才长出三个菌,菌落pcr后有1个是阳性,最终测序也是对的。关键是要连接上和不长杂菌。加油!
11楼2013-03-01 12:06:26
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sl35537417

木虫 (正式写手)

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amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-08-26 18:19:02
微型菌落是氨苄降解后生长的杂菌  可以将培养时间控制在12h-16h之间  
或者更换抗生素为羧苄青霉素,你的载体是什么?双酶切?估计是连接效率不高?
2楼2012-08-26 11:03:56
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fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-27 13:48:02
那个小菌落跟你期望没啥关系,
你知道你那个目的片段的copy的量大概多少,如果太低可以用IPTG增加copy,然后吧培养时间缩短成有梯度的,再看看载体上有别的resistance没有。
3楼2012-08-26 17:39:43
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linda90

禁虫 (初入文坛)

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4楼2012-08-26 20:43:18
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