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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达载体的构建
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lxh502976898

金虫 (小有名气)
引用回帖:
28楼: Originally posted by 三十不惑 at 2012-08-29 19:51:38
我认为两条带如果很清晰，有且仅有两条，肯定是切干净了，当然这是在单个酶仅有一个酶切位点的情况下...

请问你做连接的表达载体都是空载体吗 ？我用的是别人练了别的目的啊片段的表达载体 ，双酶切 之后替换自己的目的片段，请教你说空载体和带目的片段的载体 连接效率一样吗
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31楼2012-08-30 10:24:47
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三十不惑

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果你酶切的干净，那是否空载是没有问题的，连接效率应该是一致的。有个问题要考虑，你不要的目的片段和切开的载体大小不能一样，当然从你的描述来看应该是不一样的。
如果有空载最好用空载，虽然没有确切的证据证明空载一定好，但是就像你洗过的EP管，总会觉得可能会不干净。
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个性签名
32楼2012-08-30 17:40:06
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lanlan521

禁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
33楼2012-08-30 22:36:22
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王礼鹏

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这个是一般酶都适用的酶切体系，可以试试看，然后还可以试试设置一个DNA和载体连接的比例梯度3:1至10:1.有点碰运气，呵呵。。祝实验顺利呀
Ecor1酶切体系.pdf
http://kuai.xunlei.com/d/GRIRBQVJWAVZ?p=130497
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34楼2012-08-31 09:39:38
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lxh502976898

金虫 (小有名气)
引用回帖:
34楼: Originally posted by 王礼鹏 at 2012-08-31 09:39:38
这个是一般酶都适用的酶切体系，可以试试看，然后还可以试试设置一个DNA和载体连接的比例梯度3:1至10:1.有点碰运气，呵呵。。祝实验顺利呀
Ecor1酶切体系.pdf
http://kuai.xunlei.com/d/GRIRBQVJWAVZ?p=130497...

内容那个不能不瞎回帖啊  说明书 谁没有啊
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35楼2012-08-31 14:02:12
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lecou

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我的酶切体系一般较大，因为怕回收效率等影响会使的最终量很低，我都是50微升，里面DNA大约都十几到二十。连接体系都是比较小25微升，目的片段和质粒的比例都在5：1到10；1，仅供参考，祝你好运
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希望自己能平常心面对实验中的种种
36楼2012-08-31 14:29:29
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lxh502976898

金虫 (小有名气)
引用回帖:
36楼: Originally posted by lecou at 2012-08-31 14:29:29
我的酶切体系一般较大，因为怕回收效率等影响会使的最终量很低，我都是50微升，里面DNA大约都十几到二十。连接体系都是比较小25微升，目的片段和质粒的比例都在5：1到10；1，仅供参考，祝你好运

20ul的话 那你的质粒应该是用试剂盒提的吧  ？
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37楼2012-08-31 15:07:37
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lecou

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
37楼: Originally posted by lxh502976898 at 2012-08-31 15:07:37
20ul的话 那你的质粒应该是用试剂盒提的吧  ？...

我们实验室还是用的减法提质粒，不过我对照过两种方法的Dna浓度查不多，就是试剂盒的还是蛋白去的干净些
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希望自己能平常心面对实验中的种种
38楼2012-09-03 14:35:12
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