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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达载体的构建
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lxh502976898

金虫 (小有名气)

[交流] 原核表达载体的构建 已有17人参与

我第一次接触原核表达载体的构建 就一直连接不成功 回收后的目的片段和表达载体做电泳都有单一条带，二者连接液没有任何条带（我用的是宝生物胶回收试剂盒，DNA的浓度特别低，怀疑是这个原因） 无法判断是否连接成功 。前两次直接做转化也没有任何菌长出来，继续帮助，实验停滞了 谢谢啦。。。。
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1楼 2012-08-23 09:53:28
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lecou

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我的酶切体系一般较大，因为怕回收效率等影响会使的最终量很低，我都是50微升，里面DNA大约都十几到二十。连接体系都是比较小25微升，目的片段和质粒的比例都在5：1到10；1，仅供参考，祝你好运
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希望自己能平常心面对实验中的种种
36楼2012-08-31 14:29:29
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cliakro

木虫 (文坛精英)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
"继续帮助"……　强！虫子立起！
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2楼2012-08-23 09:59:19
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cliakro

木虫 (文坛精英)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不懂哇……路过的爬过……
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3楼2012-08-23 10:00:05
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09丁于飞

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
做转化没有任何菌长出来，说明转化有问题，不能确定连接结果如何。另外，DNA回收产物跑胶能看到带，说明DNA浓度足够作连接了。
一般不会用连接液跑胶。
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4楼2012-08-23 13:43:33
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