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KO奋斗

金虫 (正式写手)

[求助] PCR验证

从原始菌中提取一NA基因,重组到大肠杆菌BL21,产生的酶有活性,但是分子量(110Kb)与原始菌(67Kb)的不同,根据重组菌的目的序列设计引物去PCR原始菌,没有条带。现不知道该从哪里下手解决这个问题。希望大家给于帮助啊
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KO奋斗

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 674515734 at 2012-08-16 17:49:24
你的基因片段是不是插入到大肠杆菌某个基因内部了,导致形成了了一个融合蛋白。

谢谢,应该不是啊,是质粒上,没活性还很高,就是分子量不统一啊
3楼2012-08-16 18:47:58
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查看全部 8 个回答

674515734

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流! 2012-08-16 20:16:36
KO奋斗: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-08-17 08:42:40
你的基因片段是不是插入到大肠杆菌某个基因内部了,导致形成了了一个融合蛋白。
在卑微中活出精彩,在短暂中寻求永恒。。。
2楼2012-08-16 17:49:24
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woshizhufeng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
重新设计一下引物试试吧,多做几次
4楼2012-08-17 00:04:05
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果表达的蛋白分子量不对,并且你的引物还扩不出来,那说明你连接的片段不是你的基因。再重复连接一次,如果还是出现这个结果,并且如果楼主确定你的连接片段是你的基因的话,楼主可以把这个蛋白测个序,比对下看到底是什么地方出的问题,是否真的像一楼说的那样融合蛋白,个人觉得不可能,如果是真的,那真是个新现象哈,

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

5楼2012-08-17 07:37:01
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