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曾经遥远

银虫 (正式写手)

[求助] 农杆菌菌液pcr实验过程

准备做转基因,从别人那里得到了农杆菌单克隆,然后需要做菌液pcr检测一下是否有目的基因。可是偶之前都没接触过这些分子的东西,不懂怎么做。查到的文献又都没有具体的实验步骤,又木有人指导。可怜的娃,现在头可大了。有这方面经验的虫虫还请指导一下,或者有相关书籍、文献帮个忙推荐一下,在此谢过了!!
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曾经遥远

银虫 (正式写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by lillian菲 at 2012-08-11 15:09:35
恩恩,菌液浑浊即可。24小时差不多了,可以适时观察浑浊度,轻轻摇下试管或三角瓶,看到浑浊的菌液就差不多了

嗯嗯  好的  谢谢了
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12楼2012-08-11 22:32:51
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zhqu1234

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
曾经遥远: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-08-10 20:12:09
额,其实很简单啊,通俗一点说就是:农杆菌28度24h摇好后,配PCR体系,然后拿个枪头沾一下菌液戳进体系里晃晃,然后PCR就行了
2楼2012-08-10 17:58:59
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第五平原

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
曾经遥远: 金币+1, 有帮助, 嗯嗯 偶再找找看 2012-08-10 20:13:08
楼上说得对,其实和普通PCR一样,楼主要是实在不明白就去找一些学位论文,那里面讲的很详细。
勤勉
3楼2012-08-10 18:54:20
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lillian菲

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
曾经遥远: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢哈 2012-08-10 20:14:07
我们实验室做的是嗜盐菌,也是PCR之后再做酶连,转化,提质粒,测序。
具体是:先平板培养出单菌落----挑取单菌落试管液体培养---用适量菌液离心留菌体(即沉淀),再加入无菌水,混匀----沸水煮10分钟,取上清液做模板
接下来就是按照PCR正常体系做PCR即可。
不知是不是一样,希望能帮到你吧!
4楼2012-08-10 19:56:57
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