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傻子木虫 (正式写手)
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【求助】哪位用TRI zol法提过樱花的总RNA?
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| 用TRI zol法提过几次樱花和樱桃的总RNA都没提出来。哪位提过的，能不能提供一下方法? |
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johnsooh
荣誉版主 (正式写手)
此用户来自小木虫总部信号不好
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5楼2007-05-23 23:19:56
2楼2007-05-22 17:13:21
傻子
木虫 (正式写手)
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1. 匀浆处理：将组织在液氮中磨碎，100mg加入1ml TRIzol。 2．将样品在室温（15-30℃）放置5分钟。 3．4℃12000rpm离心10分钟，取上清。 4．加入0.3ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。 5．4℃12000rpm离心10分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中。 6．把水相转移到新管中，加入0.5ml异丙醇【多糖样品加入0.25ml异丙醇和0.25ml高盐溶液(0.8M柠檬酸钠和1.2M NaCl)】-20℃放置20分钟。 7．4℃15000rpm离心10分钟，移去上清。 8．用1ml 75℅乙醇洗涤RNA沉淀，使沉淀悬浮。4℃ 8000rpm离心5分钟，弃上清。 9．室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀，大约晾5-10分钟，加入40μl DEPC水，用枪头吸打几次，-70℃保存。 我是按这个步骤做的，其他的样品如烟草、番茄可以提的出来，但是樱花、樱桃、桃子都提不出来。 |
3楼2007-05-22 23:44:08
4楼2007-05-23 19:01:18
