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傻子

木虫 (正式写手)

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专业: 临床分子生物学检验

[交流] 【求助】哪位用TRI zol法提过樱花的总RNA?

用TRI zol法提过几次樱花和樱桃的总RNA都没提出来。哪位提过的，能不能提供一下方法?

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郑州大学申博已经有6人回复

1984年中国制造,长173CM,净重64kg,采用人工智能，国家免检优质产品。

1楼 2007-05-22 13:25:21

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傻子

木虫 (正式写手)

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1. 匀浆处理：将组织在液氮中磨碎，100mg加入1ml TRIzol。
2．将样品在室温（15-30℃）放置5分钟。
3．4℃12000rpm离心10分钟，取上清。
4．加入0.3ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
5．4℃12000rpm离心10分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中。
6．把水相转移到新管中，加入0.5ml异丙醇【多糖样品加入0.25ml异丙醇和0.25ml高盐溶液(0.8M柠檬酸钠和1.2M NaCl)】-20℃放置20分钟。
7．4℃15000rpm离心10分钟，移去上清。
8．用1ml 75℅乙醇洗涤RNA沉淀，使沉淀悬浮。4℃ 8000rpm离心5分钟，弃上清。
9．室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀，大约晾5-10分钟，加入40μl DEPC水，用枪头吸打几次，-70℃保存。

我是按这个步骤做的，其他的样品如烟草、番茄可以提的出来，但是樱花、樱桃、桃子都提不出来。