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傻子

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助】哪位用TRI zol法提过樱花的总RNA?

用TRI zol法提过几次樱花和樱桃的总RNA都没提出来。哪位提过的,能不能提供一下方法?
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1984年中国制造,长173CM,净重64kg,采用人工智能,国家免检优质产品。
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傻子

木虫 (正式写手)

1. 匀浆处理:将组织在液氮中磨碎,100mg加入1ml TRIzol。
2.将样品在室温(15-30℃)放置5分钟。
3.4℃12000rpm离心10分钟,取上清。
4.加入0.3ml氯仿,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
5.4℃12000rpm离心10分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中。
6.把水相转移到新管中,加入0.5ml异丙醇【多糖样品加入0.25ml异丙醇和0.25ml高盐溶液(0.8M柠檬酸钠和1.2M NaCl)】-20℃放置20分钟。
7.4℃15000rpm离心10分钟,移去上清。
8.用1ml 75℅乙醇洗涤RNA沉淀,使沉淀悬浮。4℃ 8000rpm离心5分钟,弃上清。
9.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟,加入40μl DEPC水,用枪头吸打几次,-70℃保存。

我是按这个步骤做的,其他的样品如烟草、番茄可以提的出来,但是樱花、樱桃、桃子都提不出来。
1984年中国制造,长173CM,净重64kg,采用人工智能,国家免检优质产品。
3楼2007-05-22 23:44:08
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轻5飞扬

金虫 (正式写手)

把你的方法写下来吧,看看有什么可以改进的地方,一般来讲,TRIzol的方法还是可以的
2楼2007-05-22 17:13:21
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain

我不是做植物的,问一下樱花、樱桃、桃子是不是富含多糖?
我的路靠我的脚踩出来!!!不走寻常路!!!
4楼2007-05-23 19:01:18
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johnsooh

荣誉版主 (正式写手)

此用户来自小木虫总部信号不好

照着Invitrogen的 trizol说明书,即可提出 Total RNA

如果你是平行作的烟草、番茄可以提的出来,而樱花、樱桃、桃子提不出来,那么可能要求更改针对特殊植物样本的提取方法了,可是,如果不是平行操作,平行电泳检测,则不能说明方法有问题,建议重新作
___▂▂▃▄▅▆▇█无信号︻╋████?
5楼2007-05-23 23:19:56
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