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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 求助HPLC测定血浆中一种物质的液相条件
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shengwuwuli

新虫 (初入文坛)

[交流] 求助HPLC测定血浆中一种物质的液相条件

我要用HPLC测定的一种物质，这种物质是近红外染料，易溶于甲醇和DMSO，具有光漂白性（见光不稳定），在780nm处有最大吸收，在紫外区选择214nm或254nm，但吸收不是很大。空白血浆的处理是乙腈或甲醇沉蛋白，13000r/min离心。可是不管我怎么调流动相血浆中在总有干扰峰，已经做了一个多月毫无结果（流动相是甲醇与水，），而且刚开始单独这个物质能跑很高的峰，这段时间峰却老是很小。我是刚接触液相，了解非常少。

请问师兄师姐们能否针对我的这种物质给我提些建议，在此我先谢谢了！！
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1楼 2007-05-19 22:20:42
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xiongying001

木虫 (初入文坛)
★
karl2100(金币+1):3Q
血样中成分很多，有很多基质抑制，干扰峰可能是基质抑制。建议楼主多查阅一些有关减少基质抑制方面的文献，或者走一下梯度试试，设一个梯度在你想要的峰出来以后再用多一些的水相(一般是95%)冲一下基质，冲1~2分钟(根据总的时间而定)，然后再回到初始的梯度上平衡柱子，这样应该能缓解一下基质抑制。
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4楼2007-05-23 22:14:07
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ymm117

★
可乐=枫(金币+1):谢谢应助
用岛津SPD-20AV检测器，可以在190nm-900nm范围内检测，你就可以选780nm来检测。
本来你测的是生物样品，有干扰也正常。可以试试其它前处理方法，比如固相萃取。
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2楼2007-05-21 12:35:49
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jingna

★
karl2100(金币+1):3Q
也可以用Agilent 1100的光电二极管阵列检测器，200nm－900nm。
血样的成分比较复杂，一般都是用梯度洗脱。
可以多查一些文献， journal of chromatography B 这个杂志比较全。
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3楼2007-05-23 17:58:54
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shengwuwuli

新虫 (初入文坛)
何谓基质抑制，我不太懂 望指教 呵呵
还有走梯度有什么规律可寻吗，谢谢指导！
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5楼2007-05-24 16:03:11
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