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shengwuwuli

新虫 (初入文坛)

[交流] 求助HPLC测定血浆中一种物质的液相条件

我要用HPLC测定的一种物质,这种物质是近红外染料,易溶于甲醇和DMSO,具有光漂白性(见光不稳定),在780nm处有最大吸收,在紫外区选择214nm或254nm,但吸收不是很大。空白血浆的处理是乙腈或甲醇沉蛋白,13000r/min离心。可是不管我怎么调流动相血浆中在总有干扰峰,已经做了一个多月毫无结果(流动相是甲醇与水,),而且刚开始单独这个物质能跑很高的峰,这段时间峰却老是很小。我是刚接触液相,了解非常少。

请问师兄师姐们能否针对我的这种物质给我提些建议,在此我先谢谢了!!
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jingna


karl2100(金币+1):3Q
也可以用Agilent 1100的光电二极管阵列检测器,200nm-900nm。
血样的成分比较复杂,一般都是用梯度洗脱。
可以多查一些文献, journal of chromatography B 这个杂志比较全。
3楼2007-05-23 17:58:54
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ymm117


可乐=枫(金币+1):谢谢应助
用岛津SPD-20AV检测器,可以在190nm-900nm范围内检测,你就可以选780nm来检测。
本来你测的是生物样品,有干扰也正常。可以试试其它前处理方法,比如固相萃取。
2楼2007-05-21 12:35:49
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xiongying001

木虫 (初入文坛)


karl2100(金币+1):3Q
血样中成分很多,有很多基质抑制,干扰峰可能是基质抑制。建议楼主多查阅一些有关减少基质抑制方面的文献,或者走一下梯度试试,设一个梯度在你想要的峰出来以后再用多一些的水相(一般是95%)冲一下基质,冲1~2分钟(根据总的时间而定),然后再回到初始的梯度上平衡柱子,这样应该能缓解一下基质抑制。
4楼2007-05-23 22:14:07
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shengwuwuli

新虫 (初入文坛)

何谓基质抑制,我不太懂 望指教 呵呵
还有走梯度有什么规律可寻吗,谢谢指导!
5楼2007-05-24 16:03:11
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