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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 求助HPLC测定血浆中一种物质的液相条件
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shengwuwuli

新虫 (初入文坛)

[交流] 求助HPLC测定血浆中一种物质的液相条件

我要用HPLC测定的一种物质，这种物质是近红外染料，易溶于甲醇和DMSO，具有光漂白性（见光不稳定），在780nm处有最大吸收，在紫外区选择214nm或254nm，但吸收不是很大。空白血浆的处理是乙腈或甲醇沉蛋白，13000r/min离心。可是不管我怎么调流动相血浆中在总有干扰峰，已经做了一个多月毫无结果（流动相是甲醇与水，），而且刚开始单独这个物质能跑很高的峰，这段时间峰却老是很小。我是刚接触液相，了解非常少。

请问师兄师姐们能否针对我的这种物质给我提些建议，在此我先谢谢了！！
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1楼 2007-05-19 22:20:42
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ymm117

★
可乐=枫(金币+1):谢谢应助
用岛津SPD-20AV检测器，可以在190nm-900nm范围内检测，你就可以选780nm来检测。
本来你测的是生物样品，有干扰也正常。可以试试其它前处理方法，比如固相萃取。
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2楼2007-05-21 12:35:49
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jingna

★
karl2100(金币+1):3Q
也可以用Agilent 1100的光电二极管阵列检测器，200nm－900nm。
血样的成分比较复杂，一般都是用梯度洗脱。
可以多查一些文献， journal of chromatography B 这个杂志比较全。
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3楼2007-05-23 17:58:54
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xiongying001

木虫 (初入文坛)
★
karl2100(金币+1):3Q
血样中成分很多，有很多基质抑制，干扰峰可能是基质抑制。建议楼主多查阅一些有关减少基质抑制方面的文献，或者走一下梯度试试，设一个梯度在你想要的峰出来以后再用多一些的水相(一般是95%)冲一下基质，冲1~2分钟(根据总的时间而定)，然后再回到初始的梯度上平衡柱子，这样应该能缓解一下基质抑制。
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4楼2007-05-23 22:14:07
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shengwuwuli

新虫 (初入文坛)
何谓基质抑制，我不太懂 望指教 呵呵
还有走梯度有什么规律可寻吗，谢谢指导！
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5楼2007-05-24 16:03:11
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马辰

新虫 (初入文坛)
液质有基质抑制，液相我做过也有两倍的差距，不知道是什么原因引起的
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6楼2007-05-25 21:12:28
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smile.swallow83

★ ★
hailang_zj(金币+2):欢迎参与讨论！
有关基质效应产生的原因一般认为可能源于待测组分与生物样品中的基质成分在雾滴表面离子化过程的竞争 。其竞争结果会显著地降低(离子抑制)或增加(离子增强)目标离子的生成效率及离子强度，进而影响测定结果的精密度和准确度。也有人认为基质效应是由于待测组分与基质中内源性物质共洗脱而引起的色谱柱超载所致。
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7楼2007-06-13 20:45:53
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