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412667449

新虫 (正式写手)

[求助] LPL基因序列里面有很多终止密码子,怎么回事?

最近克隆了一种鱼类的LPL基因,并对其的序列进行了测定,其长度约为1500bp。但是利用Blast里面的Translate程序进行翻译时,里面有将近15个终止密码子。至怎么回事啊?不是开放阅读框不能被终止密码子打断吗?为什么别人做出来的鱼LPL基因怎么翻译出来都是很连续的?跪求高人指点。
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robert-RBT

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
412667449: 金币+20, ★★★很有帮助, 回答的很专业啊,谢谢,我是这方面的额菜鸟,根据您的建议我再进一步看一看,万分感谢啊 2012-07-31 09:10:41
有2种可能。可能有内含子。你可以通过race得到cDNA后,剔除内含子后分析。也可以利用软件分析预测内含子,如http://augustus.gobics.de/。也有可能测序或克隆出现移码或错配的情况。这种情况可以通过高保真酶扩增序列来避免。如Phusion high-fidelity DNA polymerase.
2楼2012-07-30 21:47:04
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jiangpeace

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
412667449: 金币+10, ★有帮助, 谢谢 2012-08-18 16:44:54
你找一个其它物种的该基因与你克隆的基因比对,其它物种终止密码子对应的相近那个应该是你的密码子,而且你那个可能不是全长,如果起始密码子没找错,测序没问题,软件就会找对终止密码子
3楼2012-08-18 15:04:52
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