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changyi_23

金虫 (小有名气)

[求助] 求重叠延伸PCR分析

重叠延伸PCR中,酶是primerstar,A B片段差不多700bp左右,。左边1 2两个条带是2μL回收的C为模板,3 4为3μL回收的C为模板。5 6为2μLAB为模板,7 8为3μLAB为模板。求解目的条带为什么AB为模板的条带比用回收的C为模板的条带亮呢?标明的不明条带是什么呀?



[ Last edited by changyi_23 on 2012-7-26 at 21:51 ]
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  • 2012-07-26 21:38:39, 34.98 K

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sd3824289

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以适当减少模板的量!还有就是重叠延伸每一步的退火温度可能会变化!有非特意性条带存在,说明退火温度还不是最佳的退火温度!建议确定一下最佳的退火温度!
坚持,就像流星,即使知道最后的结果,也要勇敢的走到最后!
3楼2012-07-27 17:51:51
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zj408694018

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-27 17:11:38
C比AB的亮可能是因为C的浓度不适合PCR,调整C回收后的稀释倍数,最好做个梯度PCR确定一下。不明条带的原因很多,最好和你老板交流一下,呵呵
2楼2012-07-27 17:05:51
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kamiles_007

新虫 (初入文坛)

请问各位大虾重叠延伸PCR最多可以连接多长的DNA?
年轻真好!
4楼2013-03-14 18:13:04
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