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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于用平板涂布法计算细菌数的几个菜鸟问题
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kyoran

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于用平板涂布法计算细菌数的几个菜鸟问题

各位高手们早上好，又来到苦逼的化学生求助的时候了。

前天老不容易跑到隔壁院去借了高温灭菌锅和超净工作台用，总算把循环水接种了。经过24小时培养后出现一些问题，望各位解答。

1、由于接种的时候用平板涂布法，移取了0.50mL液体（由于没有移液枪）于固体培养基表面。现观察到固体培养基表面有液体，而且有一些液体干涸后的痕迹，能观察到有明显的菌落，同时也有一些类似斑点的东西（比菌落小并且不是圆形），请问这算是菌落吗？

2、计算杀菌后原液的细菌时做了3个浓度梯度，分别是10倍、100倍、1000倍，现观察到10倍和100倍的培养皿上没有细菌生长，而1000倍的培养皿上有少数几个菌落。请问这种现象是正常的呢还是被感染了呢？

谢谢各位高手~
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1楼 2012-07-26 12:53:37
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kyoran

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by damaomao at 2012-07-28 12:38:39
操作过程中是在超净台中操作的吗，如果没有最好将桌面用75%酒精擦一下，整个操作在酒精灯旁操作

这一次是在超净台上做的，不过只有用一根移液管，用一次就烧一烧。
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9楼2012-07-28 23:02:20
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trizol11

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
移液枪头必须灭菌，涂板等到菌液干燥后在放进恒温箱培养，（没有移液枪也要把用来移液的东西灭菌）。总之一句话尽量保证无菌操作。另外，放板的时候底朝上放置
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任重道远……
10楼2012-07-29 12:12:25
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普通回帖

tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励应助 2012-07-26 15:28:19
kyoran: 金币+1, ★★★★★最佳答案 2012-07-29 15:56:59
第一个问题，菌落应该是的，菌落小长长就会好的。但是，你是用什么涂板的，要注意无菌呀，不然实验没有保证。第二个问题，灭菌后的水，理论上应该是浓度低的菌落少，你的问题可能是1000被的污染了。
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coasttocoast。
2楼2012-07-26 14:30:49
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gy313wyn

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kyoran: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-07-29 15:57:14
做细菌实验尤其注意防止污染。像你第一块板子肯定是污染了，正常来讲只会有一种颜色大小一样的菌落。
由于这种计数方法误差比较大，重复性也不好，这就要求实验要严谨，可能是涂板的时候1000污染了，但既然10和100都没有，可能是溶液里没有菌哇~
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3楼2012-07-26 20:20:30
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kyoran

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tupac225 at 2012-07-26 14:30:49
第一个问题，菌落应该是的，菌落小长长就会好的。但是，你是用什么涂板的，要注意无菌呀，不然实验没有保证。第二个问题，灭菌后的水，理论上应该是浓度低的菌落少，你的问题可能是1000被的污染了。

关于1000的被污染，情况是这样的：我和我同学都做了类似的实验，她有一个1000的被污染了，我也有一个。这是一个污染的问题呢还是有一种什么说法能解释的呢？ 求助~
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4楼2012-07-26 21:40:42
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kyoran

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gy313wyn at 2012-07-26 20:20:30
做细菌实验尤其注意防止污染。像你第一块板子肯定是污染了，正常来讲只会有一种颜色大小一样的菌落。
由于这种计数方法误差比较大，重复性也不好，这就要求实验要严谨，可能是涂板的时候1000污染了，但既然10和100 ...

那个板子上有一些像小米粒一样的东西，很密集的，不知道是不是一种菌落呢？
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5楼2012-07-26 21:51:27
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superzrd

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主说说你的稀释过程吧，我怀疑可能是操作不规范染菌了。正常情况应是高浓度菌落数多，低浓度少的。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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化身胡杨！
6楼2012-07-26 23:52:18
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kyoran

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by superzrd at 2012-07-26 23:52:18
楼主说说你的稀释过程吧，我怀疑可能是操作不规范染菌了。正常情况应是高浓度菌落数多，低浓度少的。

实验过程实在是不好意思说了……各种错漏……而且全过程只用了一支移液管……
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7楼2012-07-28 10:27:07
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damaomao

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
8楼2012-07-28 12:38:39
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