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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助~5%的胶为何跑出来这样的条带
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luwenyi

铁虫 (初入文坛)

[求助] 求助~5%的胶为何跑出来这样的条带

用5%的琼脂糖凝胶，120V电压跑的PCR产物，为何有些跑的出来有些跑不出来呢，而且换了模板也是一样的情况
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1楼2012-07-24 21:42:47
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luwenyi

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by sd3824289 at 2012-07-25 10:26:10
如果你的PCR产物很小，建议用2-3%的琼脂糖凝胶就可以了，前面有人做过的，3%的凝胶可以分辨出50bp左右大小的条带来！而且建议楼主电泳的电压不要过大，多大的话有可能导致胶片上的电压分布不均匀而导致条带弯曲！

谢谢，因为我们用4%的胶试过，分不开，所以才选了5%的胶
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11楼2012-07-25 12:36:25
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tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-25 14:16:06
5%的胶跑pcr，你的pcr产物是多大呀，很小吗?跑胶首先要保证胶的均一性，最好二次溶胶，在溶胶之后，把胶晃一晃，使之没有气泡冒出后，在放置15分钟后倒胶。你跑的胶都是同一个管里的pcr吗？这个得确定，因为即使相同的体系和条件，你操作上的问题，也可能导致你的产物不一致。还有就是上样的问题。就这么多吧，是我做pcr的经验。看对你有用没。
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coasttocoast。
2楼2012-07-24 22:28:35
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luwenyi

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tupac225 at 2012-07-24 22:28:35
5%的胶跑pcr，你的pcr产物是多大呀，很小吗?跑胶首先要保证胶的均一性，最好二次溶胶，在溶胶之后，把胶晃一晃，使之没有气泡冒出后，在放置15分钟后倒胶。你跑的胶都是同一个管里的pcr吗？这个得确定，因为即使相同 ...

是两个条带相差很小，胶溶了是没有气泡冒出了，放15分钟的话就全凝了，不是同一个管的PCR，但是同样的产物，在另外两块胶上跑出来的点跟着两快胶上就不一样了，应该不是PCR的问题
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3楼2012-07-24 22:34:32
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mitocam

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
5%，浓度太高了吧，我一般不超过1。5％
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4楼2012-07-25 01:44:13
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