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465219642

铁虫 (初入文坛)

[求助] 求助！！把pPICZ质粒中的his-tag改造为1D4-tag怎么设计实验？？

老板给了个任务，要我把质粒中的多聚his序列改造为1D4（另外一种标记序列，可做一抗识别点），求有类似经验的同学知道一下。。。小生感激不尽！！！！
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1楼 2012-07-24 20:27:23
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-25 14:10:03
替换和被替换的片段小，常规酶切连接的方法不太好确定是否酶切成功和连接成功，建议用类似定点突变的方法来做吧。用dam+大肠杆菌，比如Dh5a扩增质粒作为模板，设计中间是1D4的突变引物进行PCR扩增质粒，DpnI消化原来的质粒模板，转化提质粒PCR验证。
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为什么
3楼2012-07-24 23:32:18
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tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
把his的标签切下来，换成1D4不就行了。构建一个pCMV-1D4质粒就可以了。
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coasttocoast。
2楼2012-07-24 22:47:04
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tupac225

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 547star at 2012-07-24 23:32:18
替换和被替换的片段小，常规酶切连接的方法不太好确定是否酶切成功和连接成功，建议用类似定点突变的方法来做吧。用dam+大肠杆菌，比如Dh5a扩增质粒作为模板，设计中间是1D4的突变引物进行PCR扩增质粒，DpnI消化原来 ...

恩，这个方法可行，我的方法太旧了。
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coasttocoast。
4楼2012-07-25 07:42:05
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