应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助！！把pPICZ质粒中的his-tag改造为1D4-tag怎么设计实验？？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 811  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

465219642

铁虫 (初入文坛)

[求助] 求助！！把pPICZ质粒中的his-tag改造为1D4-tag怎么设计实验？？

老板给了个任务，要我把质粒中的多聚his序列改造为1D4（另外一种标记序列，可做一抗识别点），求有类似经验的同学知道一下。。。小生感激不尽！！！！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2012-07-24 20:27:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-25 14:10:03
替换和被替换的片段小，常规酶切连接的方法不太好确定是否酶切成功和连接成功，建议用类似定点突变的方法来做吧。用dam+大肠杆菌，比如Dh5a扩增质粒作为模板，设计中间是1D4的突变引物进行PCR扩增质粒，DpnI消化原来的质粒模板，转化提质粒PCR验证。
赞一下 回复此楼
为什么
3楼2012-07-24 23:32:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
把his的标签切下来，换成1D4不就行了。构建一个pCMV-1D4质粒就可以了。
赞一下 回复此楼
coasttocoast。
2楼2012-07-24 22:47:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tupac225

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 547star at 2012-07-24 23:32:18
替换和被替换的片段小，常规酶切连接的方法不太好确定是否酶切成功和连接成功，建议用类似定点突变的方法来做吧。用dam+大肠杆菌，比如Dh5a扩增质粒作为模板，设计中间是1D4的突变引物进行PCR扩增质粒，DpnI消化原来 ...

恩，这个方法可行，我的方法太旧了。
赞一下 回复此楼
coasttocoast。
4楼2012-07-25 07:42:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿北京科技大学材料工程085601，求调剂 +11 cdyw 2026-04-02 11/550 2026-04-02 23:06 by 马儿快快地跑
[考研] 一志愿郑州大学材料与化工085600，求调剂 +10 吃的不少 2026-04-02 10/500 2026-04-02 22:58 by 马儿快快地跑
[基金申请] 请问共同通讯和共同一作的认可度问题 10+4 psa1234 2026-04-01 9/450 2026-04-02 22:03 by god_tian
[考研] 085600，320分求调剂 +6 大馋小子 2026-04-02 6/300 2026-04-02 21:54 by dongzh2009
[考研] 考研调剂 +3 李木子0120 2026-04-02 5/250 2026-04-02 21:45 by dongzh2009
[考研] 372分材料与化工（085600）一志愿湖南大学求调剂 +5 蓝笺片 2026-04-02 6/300 2026-04-02 21:37 by dongzh2009
[考研] 070300化学求调剂 +8 起个名咋这么难 2026-03-27 9/450 2026-04-02 20:42 by dongzh2009
[考研] 266分，一志愿电气工程，本科材料，求材料专业调剂 +7 哇呼哼呼哼 2026-04-02 7/350 2026-04-02 20:13 by yulian1987
[考研] 求生物学调剂 +10 15172915737 2026-04-01 10/500 2026-04-02 18:53 by 哦哦嗯哈
[考研] 290求调剂085701 +3 1314捧花 2026-04-02 3/150 2026-04-02 13:34 by Ecowxq666！
[考研] 08开头看过来！！！ +4 wwwwffffff 2026-03-31 6/300 2026-04-02 11:42 by 均值回归
[考研] 271求调剂 +15 勒布朗@ 2026-03-31 20/1000 2026-04-02 11:24 by Sammy2
[考研] 11408 321分求调剂 +3 huchun12138 2026-03-30 4/200 2026-04-01 22:48 by guanxin1001
[考研] 310分求调剂 +4 成功上岸wang 2026-04-01 4/200 2026-04-01 20:35 by liu823948201
[考研] 311求调剂一志愿合肥工业大学 +14 秋二十二 2026-03-30 14/700 2026-04-01 11:45 by chemdavid
[考研] 291求调剂 +3 迷蒙木木 2026-04-01 4/200 2026-04-01 11:07 by 逆水乘风
[考研] 333求调剂 +4 阿科逸 2026-03-31 4/200 2026-04-01 09:11 by jp9609
[考研] 材料科学与工程求调剂 +13 深V宿舍吧 2026-03-29 13/650 2026-03-31 19:50 by Dyhoer
[考研] 274求调剂 +6 xiao爱同学 2026-03-30 6/300 2026-03-31 10:04 by cal0306
[考研] 08工科求调剂286 +5 tgs_001 2026-03-28 5/250 2026-03-31 08:18 by 一只好果子?
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭