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465219642

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 6.5
帖子: 17
在线: 6.4小时
虫号: 1876929
注册: 2012-07-03
专业: 生物大分子结构与功能

[求助] 求助！！把pPICZ质粒中的his-tag改造为1D4-tag怎么设计实验？？

老板给了个任务，要我把质粒中的多聚his序列改造为1D4（另外一种标记序列，可做一抗识别点），求有类似经验的同学知道一下。。。小生感激不尽！！！！

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1楼 2012-07-24 20:27:23

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

tupac225

金虫 (正式写手)

MolEPI: 5
应助: 103 (高中生)
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散金: 20
红花: 4
帖子: 460
在线: 175.4小时
虫号: 1533370
注册: 2011-12-11
性别: GG
专业: 免疫生物学

引用回帖:

3楼: Originally posted by 547star at 2012-07-24 23:32:18
替换和被替换的片段小，常规酶切连接的方法不太好确定是否酶切成功和连接成功，建议用类似定点突变的方法来做吧。用dam+大肠杆菌，比如Dh5a扩增质粒作为模板，设计中间是1D4的突变引物进行PCR扩增质粒，DpnI消化原来 ...

恩，这个方法可行，我的方法太旧了。