应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助！！把pPICZ质粒中的his-tag改造为1D4-tag怎么设计实验？？
41/1返回列表
查看: 914  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

465219642

铁虫 (初入文坛)

[求助] 求助！！把pPICZ质粒中的his-tag改造为1D4-tag怎么设计实验？？

老板给了个任务，要我把质粒中的多聚his序列改造为1D4（另外一种标记序列，可做一抗识别点），求有类似经验的同学知道一下。。。小生感激不尽！！！！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2012-07-24 20:27:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
把his的标签切下来，换成1D4不就行了。构建一个pCMV-1D4质粒就可以了。
赞一下 回复此楼
coasttocoast。
2楼2012-07-24 22:47:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-25 14:10:03
替换和被替换的片段小，常规酶切连接的方法不太好确定是否酶切成功和连接成功，建议用类似定点突变的方法来做吧。用dam+大肠杆菌，比如Dh5a扩增质粒作为模板，设计中间是1D4的突变引物进行PCR扩增质粒，DpnI消化原来的质粒模板，转化提质粒PCR验证。
赞一下 回复此楼
为什么
3楼2012-07-24 23:32:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tupac225

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 547star at 2012-07-24 23:32:18
替换和被替换的片段小，常规酶切连接的方法不太好确定是否酶切成功和连接成功，建议用类似定点突变的方法来做吧。用dam+大肠杆菌，比如Dh5a扩增质粒作为模板，设计中间是1D4的突变引物进行PCR扩增质粒，DpnI消化原来 ...

恩，这个方法可行，我的方法太旧了。
赞一下 回复此楼
coasttocoast。
4楼2012-07-25 07:42:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 465219642 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭