| 查看: 3179 | 回复: 16 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
DH5a感受态细胞制备问题
|
||
|
大家好！我是第一次制备DH5a感受态，为了克隆测序使用。因为我们实验室之前没有人做过，所以在制备过程中出现了问题，想向大家请教。 我是从生工买回的大肠杆菌DH5a菌株，放于－20度保存。我先配制了LB固体和液体培养基，高压灭菌20min。灭菌结束立即将LB固体培养基倒入平板内，待其凝固后，用灭菌牙签将DH5a菌株接种到平板上（分区划线），然后置于37度烘箱过夜培养，约24小时，取出，发现已长出菌落。然后在用灭菌牙签挑取DH5a单菌落于5ml液体培养基（50ml的三角瓶装）中，然后置于摇床上培养过夜，37度，200rpm，约12小时后，取出，发现菌液出现明显的浑浊。然后，我用移液枪吸取菌液1ml放入100ml的液体LB培养基（250ml三角瓶装），然后放入摇床（37度，200rpm），3小时左右，取出一瓶测其OD600值，发现只有0.05左右，延长摇床培养时间，甚至到24小时~48小时，取出测OD600，OD600值也只是达到1点几，怎么也不会达到0.5。关于接种的整个过程都是在超净工作台上进行的，不知道出现这样的结果是什么问题。我已经作了很多次尝试，每次都是OD600达不到要求。 遇到这个问题，我真的很着急，因为等着克隆测序，所以想请大家帮忙指点迷津！感激不尽！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有175人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 我本以为简单的，被我弄复杂了
已经有6人回复
- 【原创】酶切连接转化个人经验，希望对大家有帮助
已经有67人回复
liuyu_sdili
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 53 (初中生)
- 金币: 3045.9
- 散金: 15
- 红花: 2
- 帖子: 394
- 在线: 311.7小时
- 虫号: 1130112
- 注册: 2010-10-23
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
8楼2012-07-23 17:58:51
chlorella409
木虫 (正式写手)
- 应助: 88 (初中生)
- 金币: 3245.6
- 散金: 1000
- 红花: 4
- 帖子: 376
- 在线: 182.4小时
- 虫号: 1600249
- 注册: 2012-02-05
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
2楼2012-07-21 21:22:29
3楼2012-07-21 22:40:10
beautybanana
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 22
- 应助: 23 (小学生)
- 贵宾: 0.02
- 金币: 2973.8
- 散金: 5088
- 红花: 26
- 帖子: 1694
- 在线: 485.8小时
- 虫号: 1142157
- 注册: 2010-11-09
- 性别: GG
- 专业: 纳米生物学
4楼2012-07-22 09:57:33
