应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 3' RACE疑问
51/1返回列表
查看: 2590  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

含羞草liu

新虫 (小有名气)

[求助] 3' RACE疑问

我提取了RNA，用设计的兼并引物扩出了目的基因的部分序列，然后根据得到的序列设计特异性引物，进行3’ RACE，使用的是Takara的3’Full RACE Core Set Ver.2.0试剂盒。我共设计了两对引物，分别与试剂盒自带的Outer primer进行Outer PCR时，扩出的条带如图1所示。（其中RNA 1 和RNA 2 是我两次提取的RNA，引物1在扩出的部分序列5’端的50bp处，引物2在扩出部分序列5’端的143bp处）。
之前用兼并引物扩出出部分序列，是用的RNA1 反转录成的cDNA为模板的。 当用RNA1进行3’RACE时， 引物1条带很淡，而引物2进却有两条带，同样对于RNA 2，3’RACE的结果也不相同。我很疑惑，RACE可以出现两条带吗？如果是因为引物特异性不高而出现两条带，为什么不同的RNA的结果又不一样呢？这是引物的问题，还是提取的RNA质量的问题呢？还需要进行Inner PCR反应吗？
请各位帮个忙！不胜感激！！！

图1 3’ RACE电泳结果
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
努力，奋斗，拼搏。。。
1楼 2012-07-20 10:16:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

含羞草liu

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by nmhsd at 2012-07-23 00:15:26
不要纠结了，引物1和引物2，中间隔了多大，看看是不是两条亮带大小的差值，如果是，证明你RACE中引物1和引物2均成功，赶紧去测序吧。

我已经送去测序了，但测序的结果很不好。我是进行双向测序，5’端使用自己设计的引物都能测得序列，3’端使用Outer Primer，测序的结果均失败。而且5’端的序列前半部分的图谱很好，重叠很少，但后半部分重叠很严重。测序公司给我的反馈是，目的序列有较复杂的结构，很难测序。要怎样才能得到较好的RACE结果呢？我是直接用PCR产物送测的，但如果转化到大肠杆菌里再提取质粒，结果会好些吗？
赞一下 回复此楼
努力，奋斗，拼搏。。。
10楼2012-07-27 16:51:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有你的目的条带吗？有的话，拿去直接测一下就知道了，如果没有，那就没用，可能要重新做
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

含羞草liu
2楼2012-07-20 11:28:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

含羞草liu

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-20 11:28:56
有你的目的条带吗？有的话，拿去直接测一下就知道了，如果没有，那就没用，可能要重新做

因为目的序列是未知的，不知道其准确长度，所以，不知道是否是目的条带……
赞一下 回复此楼
努力，奋斗，拼搏。。。
3楼2012-07-21 09:18:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 含羞草liu at 2012-07-21 09:18:44
因为目的序列是未知的，不知道其准确长度，所以，不知道是否是目的条带……...

你可以测一下看看到底是什么序列，你总有个实验目的吧，不知道目的序列有点不对吧
赞一下 回复此楼
4楼2012-07-21 17:39:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 不应该看fileCode +5 且听虎啸 2026-08-12 6/300 2026-08-12 16:26 by Tide man
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[基金申请] FileCode能看出啥？ +8 要乐观耀哥 2026-08-10 21/1050 2026-08-12 16:08 by 云上清扬
[基金申请] filecode +13 documentary 2026-08-10 15/750 2026-08-12 15:56 by 云上清扬
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 35/1750 2026-08-12 14:38 by sdfapple719
[论文投稿] 职称评审，求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 13/650 2026-08-11 09:49 by 家与远方
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭