应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 细菌基因组文库构建的相关问题
242/3返回列表上一页123下一页
查看: 3195  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MicEPI ，点击这里进行查看

tzaixmc

木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2012-07-25 08:42:28
我觉得单酶切的应该磷酸化处理下

我是单酶切的啊，CIAP处理了，载体自连还是很多啊？是不是CIAP失效了啊？
赞一下 回复此楼
11楼2012-07-25 10:26:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinpeng_6118

木虫 (正式写手)
不好说，我们CIAP处理后的载体自连率很低的
赞一下 回复此楼
人生百态原为海，看破红尘方为岸！
12楼2012-07-25 14:23:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tzaixmc

木虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2012-07-25 14:23:30
不好说，我们CIAP处理后的载体自连率很低的

你们用的什么公司的CIAP啊？我用的takara的
赞一下 回复此楼
13楼2012-07-25 19:47:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinpeng_6118

木虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by tzaixmc at 2012-07-25 19:47:52
你们用的什么公司的CIAP啊？我用的takara的...

也是takara的，但自连率很低的
赞一下 回复此楼
人生百态原为海，看破红尘方为岸！
14楼2012-07-26 13:13:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by tzaixmc at 2012-07-25 10:26:01
我是单酶切的啊，CIAP处理了，载体自连还是很多啊？是不是CIAP失效了啊？...

请问你构建的革兰氏阳性菌的基因文库吗？我现在基因都提不出来，我采用的事异丙醇沉淀法，发现异丙醇沉淀后没有絮状沉淀。能把你们的提取方法给我吗？
赞一下 回复此楼
nothing isimpossible
15楼2012-11-14 09:49:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tzaixmc

木虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by hraikeyan at 2012-11-14 09:49:21
请问你构建的革兰氏阳性菌的基因文库吗？我现在基因都提不出来，我采用的事异丙醇沉淀法，发现异丙醇沉淀后没有絮状沉淀。能把你们的提取方法给我吗？...

不是，是阴性的
回复此楼
16楼2012-11-14 11:40:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by tzaixmc at 2012-11-14 11:40:26
不是，是阴性的...

那你们是用试剂盒提的？还是自配溶液提的？
赞一下 回复此楼
nothing isimpossible
17楼2012-11-14 12:10:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tzaixmc

木虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by hraikeyan at 2012-11-14 12:10:10
那你们是用试剂盒提的？还是自配溶液提的？...

都试过，都行
回复此楼
18楼2012-11-14 22:50:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2012-07-20 15:47:03
载体和目的片段的浓度没准确测过，也就简单跑了下核酸电泳。一般来说，目的片段与载体的摩尔比例在10:1比较合适。你的意思是，目的片段比载体多，连接不完全吧？，假设这样说，10ng DNA就完全包含你的所有DNA多样性 ...

我想用96孔板来做文库中目标基因的筛选。96孔板应该怎么选择呢？需要考虑那些问题？我的是细菌，需要离心出去培养基。96孔板中培养细菌，培养基的加量应该是多少？
赞一下 回复此楼
nothing isimpossible
19楼2012-12-20 18:51:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tzaixmc

木虫 (正式写手)
普通无菌的96孔板就行吧，有一种96孔板离心机可以用，一般培养基加150到200微升左右
赞一下 回复此楼
20楼2012-12-20 20:37:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tzaixmc 的主题更新
242/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 师弟论文见刊大半年才想起来申请专利，还能抢救一下吗？ +5 13108017953 2026-09-21 5/250 2026-09-27 16:46 by Leogzhya
[教师之家] 某top大学教授说“能够在市场中兑现的能力才是真能力”无比同意！ +3 zju2000 2026-09-26 3/150 2026-09-27 16:26 by lala1008
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:26 by 4IW0sJvtEqX8
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:15 by 4IW0sJvtEqX8
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 oeyPlfmMUpOC 2026-09-26 3/150 2026-09-27 09:13 by 4IW0sJvtEqX8
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:44 by XgCC8uTcwILl
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:42 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:32 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:08 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:05 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:56 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 5/250 2026-09-27 05:53 by XgCC8uTcwILl
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:50 by XgCC8uTcwILl
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 5/250 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 6/300 2026-09-27 05:42 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 PGTSwSC3F6nQ 2026-09-24 5/250 2026-09-25 11:19 by yhq9807
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 PGTSwSC3F6nQ 2026-09-24 7/350 2026-09-25 11:18 by yhq9807
[教师之家] 课题组招2027级博士 上海工程技术大学 激光智能制造方向 +4 oxidpl 2026-09-20 6/300 2026-09-24 20:37 by oxidpl
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭