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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 细菌基因组文库构建的相关问题
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tzaixmc

木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2012-07-25 08:42:28
我觉得单酶切的应该磷酸化处理下

我是单酶切的啊，CIAP处理了，载体自连还是很多啊？是不是CIAP失效了啊？
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11楼2012-07-25 10:26:01
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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)
不好说，我们CIAP处理后的载体自连率很低的
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人生百态原为海，看破红尘方为岸！
12楼2012-07-25 14:23:30
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tzaixmc

木虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2012-07-25 14:23:30
不好说，我们CIAP处理后的载体自连率很低的

你们用的什么公司的CIAP啊？我用的takara的
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13楼2012-07-25 19:47:52
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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by tzaixmc at 2012-07-25 19:47:52
你们用的什么公司的CIAP啊？我用的takara的...

也是takara的，但自连率很低的
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人生百态原为海，看破红尘方为岸！
14楼2012-07-26 13:13:05
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hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by tzaixmc at 2012-07-25 10:26:01
我是单酶切的啊，CIAP处理了，载体自连还是很多啊？是不是CIAP失效了啊？...

请问你构建的革兰氏阳性菌的基因文库吗？我现在基因都提不出来，我采用的事异丙醇沉淀法，发现异丙醇沉淀后没有絮状沉淀。能把你们的提取方法给我吗？
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nothing isimpossible
15楼2012-11-14 09:49:21
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tzaixmc

木虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by hraikeyan at 2012-11-14 09:49:21
请问你构建的革兰氏阳性菌的基因文库吗？我现在基因都提不出来，我采用的事异丙醇沉淀法，发现异丙醇沉淀后没有絮状沉淀。能把你们的提取方法给我吗？...

不是，是阴性的
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16楼2012-11-14 11:40:26
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hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by tzaixmc at 2012-11-14 11:40:26
不是，是阴性的...

那你们是用试剂盒提的？还是自配溶液提的？
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nothing isimpossible
17楼2012-11-14 12:10:10
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tzaixmc

木虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by hraikeyan at 2012-11-14 12:10:10
那你们是用试剂盒提的？还是自配溶液提的？...

都试过，都行
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18楼2012-11-14 22:50:17
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hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2012-07-20 15:47:03
载体和目的片段的浓度没准确测过，也就简单跑了下核酸电泳。一般来说，目的片段与载体的摩尔比例在10:1比较合适。你的意思是，目的片段比载体多，连接不完全吧？，假设这样说，10ng DNA就完全包含你的所有DNA多样性 ...

我想用96孔板来做文库中目标基因的筛选。96孔板应该怎么选择呢？需要考虑那些问题？我的是细菌，需要离心出去培养基。96孔板中培养细菌，培养基的加量应该是多少？
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nothing isimpossible
19楼2012-12-20 18:51:34
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tzaixmc

木虫 (正式写手)
普通无菌的96孔板就行吧，有一种96孔板离心机可以用，一般培养基加150到200微升左右
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20楼2012-12-20 20:37:25
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