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soffy0214

铜虫 (小有名气)

[求助] 今天提了一天的RNA,结果在紫外下只看到一团黑色。求分析!

我很确定我的rna是提出来了的。我用甲醛变性胶,加2微升EB,胶是红色的。然后加10微升样电泳,样中加4微升甲醛,2微升上样缓冲液,2微升10倍的MOPS缓冲液。检测时什么都看不见,只在溴酚蓝的位置看到一团黑色的东西。A260和A280都是负值。我的RNA哪去了?求解!

[ Last edited by soffy0214 on 2012-7-19 at 08:24 ]
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上帝关上一扇门,就会打开一扇窗。
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-20 13:40:02
不一定,如果提出的RNA量不大而降解厉害的话有可能带跑不出来,这个是正常的,今天我还测试了一下,提完RNA后测浓度,用NANODROP,如果点上样,马上点测浓度,浓度是250ng/ul, 如果延迟10秒后再扣上测量杆再测,浓度就是220ng/ul。
11楼2012-07-19 20:07:23
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jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你怎么确定你的RNA一定提出来了呢?然后就是你的跑胶条件是多少?
2楼2012-07-19 08:38:47
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soffy0214

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-19 08:38:47
你怎么确定你的RNA一定提出来了呢?然后就是你的跑胶条件是多少?

因为有一团白色沉淀啊。加50微升的DEPC水后就溶解了。我使用trizol提的。60V,30min
上帝关上一扇门,就会打开一扇窗。
3楼2012-07-19 09:42:57
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soffy0214

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-19 08:38:47
你怎么确定你的RNA一定提出来了呢?然后就是你的跑胶条件是多少?

即使是降解了,也不该没有任何痕迹啊。
上帝关上一扇门,就会打开一扇窗。
4楼2012-07-19 09:44:57
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