应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 今天提了一天的RNA，结果在紫外下只看到一团黑色。求分析！
121/2返回列表12下一页
查看: 1930  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

soffy0214

铜虫 (小有名气)

[求助] 今天提了一天的RNA，结果在紫外下只看到一团黑色。求分析！

我很确定我的rna是提出来了的。我用甲醛变性胶，加2微升EB，胶是红色的。然后加10微升样电泳，样中加4微升甲醛，2微升上样缓冲液，2微升10倍的MOPS缓冲液。检测时什么都看不见，只在溴酚蓝的位置看到一团黑色的东西。A260和A280都是负值。我的RNA哪去了？求解！

[ Last edited by soffy0214 on 2012-7-19 at 08:24 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
上帝关上一扇门，就会打开一扇窗。
1楼 2012-07-18 23:04:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-19 15:18:46
A260，280以及A260/280比值都可以用于分析RNA纯度。你的值都是负的，说明RNA降解了或没有提出来。你提出的白色沉淀有可能只是组蛋白，一般提出RNA应该是胶状和管差不多颜色而非白色沉淀，或者你获得的RNA量太多和部分蛋白沉淀在一起形成白色物，但是从你的A260，280值来看，是没有提出来。白色的应该是组蛋白，因为组蛋白溶解于水和稀酸。
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2012-07-19 10:09:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你怎么确定你的RNA一定提出来了呢？然后就是你的跑胶条件是多少？
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-19 08:38:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

soffy0214

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-19 08:38:47
你怎么确定你的RNA一定提出来了呢？然后就是你的跑胶条件是多少？

因为有一团白色沉淀啊。加50微升的DEPC水后就溶解了。我使用trizol提的。60V，30min
赞一下 回复此楼
上帝关上一扇门，就会打开一扇窗。
3楼2012-07-19 09:42:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

soffy0214

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-19 08:38:47
你怎么确定你的RNA一定提出来了呢？然后就是你的跑胶条件是多少？

即使是降解了，也不该没有任何痕迹啊。
赞一下 回复此楼
上帝关上一扇门，就会打开一扇窗。
4楼2012-07-19 09:44:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by soffy0214 at 2012-07-19 09:44:57
即使是降解了，也不该没有任何痕迹啊。...

50μl水溶解，有点多吧，我以前就用大约一半的量，然后跑胶就150v左右跑10min不到，白色的沉淀应该不是你要的RNA
赞一下 回复此楼
5楼2012-07-19 09:51:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

soffy0214

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by chenguestc at 2012-07-19 10:09:10
A260，280以及A260/280比值都可以用于分析RNA纯度。你的值都是负的，说明RNA降解了或没有提出来。你提出的白色沉淀有可能只是组蛋白，一般提出RNA应该是胶状和管差不多颜色而非白色沉淀，或者你获得的RNA量太多和部 ...

我还是按照以前的步骤，先用trizol溶液裂解，加氯仿，然后用异丙醇沉淀，请问哪一步出现问题会出现这种情况？这次可能是没提出RNA来，沉淀的颜色太白了，还很分散。
赞一下 回复此楼
上帝关上一扇门，就会打开一扇窗。
7楼2012-07-19 13:31:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-20 13:39:39
其实我觉得降解的可能比较大，提多少肯定都能提出来。实验前，请问RNase AWAY把实验台等擦拭干净，操作过程中，每步也注意一下应该问题不大啊，只有再做一次看。实在不行找个你的师兄师姐的带你一起做一次。
赞一下 回复此楼
8楼2012-07-19 16:32:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sjjsy7

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-20 13:39:50
如果说你A260/A280是负值，那白色沉淀物很有可能是蛋白质，提RNA的前期准备很重要的，比如研钵和枪头最好用DEPC水泡一下，不然很容易降解掉！是在不行就让师兄弟带一下！
赞一下 回复此楼
9楼2012-07-19 19:37:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

soffy0214

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by chenguestc at 2012-07-19 16:32:40
其实我觉得降解的可能比较大，提多少肯定都能提出来。实验前，请问RNase AWAY把实验台等擦拭干净，操作过程中，每步也注意一下应该问题不大啊，只有再做一次看。实在不行找个你的师兄师姐的带你一起做一次。

没有师兄师姐。降解了也会有弥散的带啊。不知道是不是试剂的问题。
赞一下 回复此楼
上帝关上一扇门，就会打开一扇窗。
10楼2012-07-19 19:45:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 soffy0214 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学调剂 +5 yzysaa 2026-03-21 5/250 2026-03-21 22:12 by peike
[考研] 311求调剂 +13 冬十三 2026-03-15 14/700 2026-03-21 22:10 by peike
[考研] 333求调剂 +5 87639 2026-03-21 7/350 2026-03-21 19:31 by ColorlessPI
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +6 嘉年新程 2026-03-15 6/300 2026-03-21 17:07 by Dream007008
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂！ +3 不想理你 2026-03-16 3/150 2026-03-21 03:59 by JourneyLucky
[考研] 机械专硕299求调剂至材料 +3 kkcoco25 2026-03-16 4/200 2026-03-21 03:52 by JourneyLucky
[考研] 二本跨考郑大材料306英一数二 +3 z1z2z3879 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:29 by JourneyLucky
[考研] 321求调剂 +9 何润采123 2026-03-18 11/550 2026-03-20 23:19 by JourneyLucky
[考研] 323求调剂 +3 洼小桶 2026-03-18 3/150 2026-03-20 22:54 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工 +8 安全上岸！ 2026-03-16 8/400 2026-03-20 22:13 by luoyongfeng
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
[考研] 289求调剂 +6 怀瑾握瑜l 2026-03-20 6/300 2026-03-20 20:30 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
[考研] 一志愿吉林大学材料学硕321求调剂 +11 Ymlll 2026-03-18 15/750 2026-03-20 19:40 by 丁丁*
[考研] 085600材料与化工求调剂 +6 绪幸与子 2026-03-17 6/300 2026-03-19 13:27 by houyaoxu
[考研] 材料，纺织，生物（0856、0710），化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] 一志愿苏州大学材料工程（085601）专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +6 大火山小火山 2026-03-16 8/400 2026-03-17 15:05 by 无懈可击111
[考研] 11408 一志愿西电，277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭