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11楼2012-07-19 15:39:23

@xiaowanzi

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提取组织mRNA的话，用试剂盒效果会好，我就是用试剂盒提的，A260/A280可以达到1.8。

12楼2012-07-19 15:56:17

stewart3261

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11楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-19 15:39:23
就上个样，很简单，小木虫里帖子挺多

谢谢！我正在找呢！十分感谢。
RNA的吸光度比值偏小跟稀释溶剂有关吗？我看到有说用TE稀释在测定时比值会比较大

13楼2012-07-19 15:57:42

niuneat

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你吸取三色相的时候，尽量少吸点，不要吸取到中间的蛋白层，这是主要的蛋白质污染，其次，你可以进行RNA纯化

14楼2012-07-19 22:14:57

stewart3261

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引用回帖:

12楼: Originally posted by @xiaowanzi at 2012-07-19 15:56:17
提取组织mRNA的话，用试剂盒效果会好，我就是用试剂盒提的，A260/A280可以达到1.8。

谢谢啊。麻烦问一下，你用的是什么试剂盒，哪个公司的？

15楼2012-07-21 09:40:55

wfli.bees

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RNA OD 260/280 1.5说明提取物不纯，蛋白残留严重，至于是用DEPC 水稀释还是TE稀释，我认为并不重要，我是用前者稀释的，完全没有问题。阴性对照ct值在25到28左右，我想比较大的可能是发生污染，这可以从融解曲线出峰位置可以明白，出峰位置如果与目的扩增片段位置一致则肯定是污染；建议使用新试剂，同时实验前后注意实验环境、器具清洁消毒。另外的可能是引物二聚体，也可从融解曲线判断出来，所以仔细研究溶解曲线很重要。祝实验顺利。

16楼2012-07-21 14:40:04

stewart3261

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引用回帖:

16楼: Originally posted by wfli.bees at 2012-07-21 14:40:04
RNA OD 260/280 1.5说明提取物不纯，蛋白残留严重，至于是用DEPC 水稀释还是TE稀释，我认为并不重要，我是用前者稀释的，完全没有问题。阴性对照ct值在25到28左右，我想比较大的可能是发生污染，这可以从融解曲线出 ...

谢谢帮助！我今天又提了一次RNA，然后用没有稀释的DEPC水直接溶解RNA，然后分别取10ul稀释到2ml的DEPC和TE中测吸光度，结果有明显的不同。TE的在2左右，而DEPC远达不到1.8。

你好，我想问一下那个阴性对照的扩增是由于什么污染引起的呢？是引物还是试剂呢？

17楼2012-07-22 15:44:06