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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
fengyunqb: 金币+4, ★★★很有帮助, 很热心的帮助。很有用的建议。 2012-07-17 09:22:43
引用回帖:
10楼: Originally posted by fengyunqb at 2012-07-16 14:17:35
你的建议很中肯，哎，导师都不鸟我，让自己摸索。本来实验室想研究这个基因表达的蛋白和一些药物的作用情况，但试了几次都没刻出来，可能不够专业，RACE-PCR也不靠谱，谢谢你的建议，我找人商量下。谢谢你哦。给我 ...

加油做吧，小伙子...大家都是从那过程走过来的...
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fengyunqb
11楼2012-07-16 15:21:56
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fengyunqb

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2012-07-16 15:21:56
加油做吧，小伙子...大家都是从那过程走过来的......

你好，救救我，我想来想去，还是来克隆斑马鱼的这个预测基因，NCBI里面有两种形式的该基因的预测序列。除了一个中间比另一个多了10个氨基酸外，一模一样。我想做这个基因对应的蛋白的一些功能及与药物的作用情况。我能直接来克隆他们吗？如果出来东西了测序对比一下如果一样就可以做接下来的工作了是吗？迷茫，一个人在外地，想赶紧完事，求救。
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12楼2012-07-20 15:19:14
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

注意克隆cDNA。选用什么宿主表达？
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13楼2012-07-20 15:33:51
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fengyunqb

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2012-07-20 15:33:51
注意克隆cDNA。选用什么宿主表达？

恩，我想这样试试。周期应该比克隆完全未知的基因快多了。就是没什么创新。主要做后续工作功能什么的。宿主的话酵母吧。还有表达的问题也许蛋白没有活性。但我还是想试一试。不想做的太久，希望一切顺利。谢谢你的帮助。希望能拿到蛋白，哈哈。大恩不言谢啊。有什么建议给我吗。谢谢。
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14楼2012-07-20 18:41:10
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

做功能？什么酶？容易做吗？已知的也只是putative，需要你的结构生物学等方法验证功能...
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fengyunqb
15楼2012-07-20 19:27:20
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fengyunqb

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
15楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2012-07-20 19:27:20
做功能？什么酶？容易做吗？已知的也只是putative，需要你的结构生物学等方法验证功能...

我是想克隆一个鱼类的基因，然后表达得到蛋白研究这个蛋白与药物、配体的作用情况。现在是斑马鱼的该基因有预测序列。其他鱼类没有。我是该来克隆这个预测基因还是用RACE方法克隆另外一种鱼完全未知的基因，怕后一种方法周期太长。反正我的重点在拿到蛋白，想走前一种捷径。你有什么好的建议吗。谢谢。
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16楼2012-07-21 11:16:56
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

肯定是斑马鱼的意义大
其他的泥鳅啥的，人家都不公认。当然做模式生物意义大...只是预测，功能未知，也是新基因...
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17楼2012-07-21 12:44:21
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