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fengyunqb

新虫 (小有名气)

[求助] 课题求助。求助。分子生物学

求助求助。。现在我在写自己的课题计划，找不到方向感。我的课题是这样的：我是想克隆鱼类一种基因。这个基因在哺乳动物NCBI已经有确定的基因序列，而鱼类只有斑马鱼、罗非鱼的预测序列，前面有PREDICTED字样。方案一：直接用它自己设计引物克隆斑马鱼的那个预测序列；方案二：改成另外一种鱼，用哺乳动物已知的和鱼类预测的多序列比对寻找保守区设计兼并引物扩增然后RACE，我怕前一种方法不靠谱，后一种方法难度太大，出不来结果。谢谢指点迷津。万分感谢。
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1楼 2012-07-15 16:30:23
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fengyunqb

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2012-07-20 15:33:51
注意克隆cDNA。选用什么宿主表达？

恩，我想这样试试。周期应该比克隆完全未知的基因快多了。就是没什么创新。主要做后续工作功能什么的。宿主的话酵母吧。还有表达的问题也许蛋白没有活性。但我还是想试一试。不想做的太久，希望一切顺利。谢谢你的帮助。希望能拿到蛋白，哈哈。大恩不言谢啊。有什么建议给我吗。谢谢。
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14楼2012-07-20 18:41:10
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我怕前一种方法不靠谱?何以见得？你可以验证下predicted ，是否是全长.这方案比你第一种方法更加简单易行.
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2楼2012-07-15 18:22:32
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fengyunqb

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2012-07-15 18:22:32
我怕前一种方法不靠谱?何以见得？你可以验证下predicted ，是否是全长.这方案比你第一种方法更加简单易行.

恩，你的意思是我可以克隆斑马鱼这个预测的基因，克隆出来测序再拿回去比较验证一下吗？如果对了然后再做这个基因表达、功能等。。我的想法是能这样做固然很好，工作量轻松多了。就怕没什么创新，如果克隆鲫鱼的完全未知的呢复杂得多，未知因素也很多。不知道该如何着手实验。谢谢你的关注，你的只言片语对我来说也是莫大的帮助。
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3楼2012-07-15 19:25:32
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fengyunqb

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2012-07-15 18:22:32
我怕前一种方法不靠谱?何以见得？你可以验证下predicted ，是否是全长.这方案比你第一种方法更加简单易行.

如果直接克隆斑马鱼那个预测基因的话。万一NCBI里面预测的那个基因是错的，我不是白费功夫了。纠结。
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4楼2012-07-15 19:27:42
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