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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RT-PCR 实验技术
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geek23

木虫 (小有名气)

[求助] RT-PCR 实验技术

最近做RT-PCR 出现一个问题 麻烦大家帮忙分析下:
1-4号泳道为同一细胞 不同药物处理下提取RNA 进行RT-PCR(beta-actin) 的结果
3,4号泳道 条带较弱,加大了模板的量重新PCR 结果依然如图,测定cDNA浓度,相差不大.
希望高手指点如何把beta -actin条带P 的一样亮啊! 谢谢!~




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Bethechangeyouwishtosee.
1楼 2012-07-12 09:33:31
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geek23

木虫 (小有名气)
2楼2012-07-12 20:02:40
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青青筱竹

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
小丹木木: 金币+1, 鼓励应助 2012-07-18 14:03:26
3和4的条带好暗，但1和2也不算很量，建议：模板含有抑制物或者引物降解，在或者退火温度太高，延伸时间太短，先把退火温度降一点，再看看效果嘛！
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敬畏科学
3楼2012-07-18 13:44:57
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
你p了多少个循环啊？要不把胶回收了，再扩增一次吧。
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
4楼2012-07-19 11:19:32
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geek23

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by snoopyzxx at 2012-07-19 11:19:32
你p了多少个循环啊？要不把胶回收了，再扩增一次吧。

25个循环
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Bethechangeyouwishtosee.
5楼2012-07-19 15:29:18
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牙牙没有故事

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

是不是RNA 降解了呀 重新P的时候有没有测模版的浓度啊？ 所不定降解了。。。
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6楼2012-07-19 16:07:21
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geek23

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 牙牙没有故事 at 2012-07-19 16:07:21
是不是RNA 降解了呀 重新P的时候有没有测模版的浓度啊？ 所不定降解了。。。

测了的 模板浓度都不低
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Bethechangeyouwishtosee.
7楼2012-07-19 17:35:11
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安必奇

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
8楼2012-07-20 16:19:48
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

PCR产物量不够时适当增加几个循环，或者直接稀释PCR产物后作为模板再进行PCR扩增。另外可以试试降低退火温度，适当延长退火时间和延伸时间。
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9楼2012-07-20 16:42:10
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thinka

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

或许该换对引物或者反应体系
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10楼2012-07-20 19:42:16
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