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请教硫酸咔唑法测糖含量中的原理以及换算因素？
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各位虫友，请教大家一个问题，我最近要用到硫酸咔唑法测一个酸性多糖的糖含量，对于这个方法的原理以及计算方法有些不明白，希望能得到各位赐教。 1.原理问题 我查看文献有其原理有两种说法，一说是多糖在硫酸作用下水解成含糖醛酸结构的单糖，然后糖醛酸与咔唑反应生成紫红色的化合物，其在~530nm处有吸收，可通过紫外分光光度计测其吸收值，进而计算多糖含量。 另一说法是多糖在硫酸作用下先水解成单糖，单糖再次分解成糠醛，糠醛与咔唑反应生成紫红色的化合物，其在~530nm处有吸收，可通过紫外分光光度计测其吸收值，进而计算多糖含量。 对于其原理，不知哪种说法是准确的，希望有懂这个的可以告知一声。 2.换算因素问题 在用硫酸咔唑法建立标准曲线时，文献多用的是葡萄糖醛酸溶液而非纯的多糖当标准品，但是供试品却是多糖，这中间应该存在一个换算因素F，可是这个换算因素F的计算，并没有查到哪篇文献讲得很清楚，个人理解是，用硫酸咔唑法测多糖吸光度A530nm，通过标准曲线计算的结果应该是葡萄糖醛酸的含量，再除以葡萄糖醛酸占多糖中的质量比即是多糖的含量，不知我的理解是否正确？ 举例：如我要测一个多糖heparosan的含量（结构见下图），文献报道其二糖分子量为392.9，已知葡萄糖醛酸的分子量为194.14那么它的换算因素 F=1/(194.14/392.9)，不知道我的算法是否正确，求指教！  Repeating disaccharide unit of heparosan |
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2楼2012-07-11 21:49:20
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有一个疑惑，问一下硫酸-苯酚法和硫酸-咔唑法测糖含量的区别？ 文献报道说硫酸-苯酚法是测总糖含量，也即酸性+中性+碱性糖 含量，而硫酸-咔唑法测得是酸性糖的含量，不知道具体反映在原理上是什么区别？ 我有一个猜想是，酸性糖中有糖醛酸结构，用硫酸-咔唑法测的时候酸性多糖在浓硫酸作用下水解成带有糖醛酸结构的糠醛，此糠醛能与咔唑反应生成紫红色化合物而显色，如果是这个原理的话，那么多糖中其它不含糖醛酸结构的糖类在这个分析中是不反应出来的，也即硫酸咔唑法只测多糖中的酸性糖部分。因而，同样的多糖，用硫酸-苯酚法测出来的结果往往会比用硫酸-咔唑法测出来的结果偏大些。 这个猜想中也有一个比较模糊的地方不太清楚，就是所谓只测酸性糖部分，是指多糖中的酸性多糖部分结构里面的具体酸性单糖成分，还是指多糖中有酸性多糖和中性多糖，但是测的是酸性多糖整体。回到我上面那个多糖结构来说，也即硫酸-咔唑法测得是那个结构片段里面的左半部分，还是整体的。这是有区别的。 至于你说的两部分在硫酸作用下最后都水解成了糠醛，应该是测的整体的糖含量，但是我觉得有一个可能性是水解生产的糠醛部分中那个-R基团可能不太一样，左半部分糠醛上的-R基团可能带有-COOH，而右半部分糠醛上的-R基团上没有-COOH，因而可能真正与咔唑起颜色反应的只有带-COOH部分的那个糖 ，也即硫酸-咔唑法测得的结果应该是该多糖中的葡萄糖醛酸部分而不是整个多糖的含量了，那么整个多糖的含量实际上应该比测得值更大，也即是测得的糖醛酸的含量除于糖醛酸占多糖中的比例。 当然，如果是另外一种情况的话，也即酸性糖整体都参与了反应，跟带不带-COOH无关的话，那么酸性多糖的含量就可以粗略的近似等于所测得的葡萄糖醛酸的含量了。 呵呵…我也不知到哪种可能是正确的，猜测而已。 |
3楼2012-07-12 19:21:54