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Q-L-?

金虫 (正式写手)

难得糊涂

[求助] 紧急求助--关于霉菌接种、菌悬液制备相关问题 已有1人参与

我是从菌保中心购买的黑曲霉、黄曲霉和扩展青霉的安瓶干菌落
现已活化至试管斜面培养基中
接下来打算做抑菌圈及最低抑菌浓度MIC实验
想请教一下各位大侠:
1、我现在是否需要将菌接种到平板培养基上培养呢?如何接种?
2、霉菌培养到什么程度时可以用于上述实验?
3、我该如何制备霉菌悬液呢?
非常感谢!!!!!

[ Last edited by Q-L-? on 2012-7-9 at 09:38 ]
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匿名

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6楼2012-10-13 11:00:50
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zjwsw

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1、黑曲霉、黄曲霉和扩展青霉分别接种于茄子瓶中,30度培养7-10天,扩展青霉由于孢子少可多培养2个茄子瓶。
2、孢子悬浮液的制备:用含吐温的PBS无菌水洗下孢子,收集到含玻璃珠的三角瓶中,充分震荡,并用无菌的8层纱布过滤,滤液经低温高速离心,再用少量无菌水收集沉淀。用血球计数板统计孢子数,备用。一般孢子悬浮液要及时使用,在4度冰箱中保存不超过7天。
3、抑菌圈及最低抑菌浓度MIC实验,只要吸取0.1ml的孢子悬浮液混入平板(注意控制温度不要把菌烫死)或吸取0.1ml的孢子悬浮液到指定的药物浓度中就行,培养几天观察抑菌圈或浑浊度。
4、先说到这里,若做了有其他问题再说。
4楼2012-07-09 11:19:14
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普通回帖

zjwsw

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
zhang8826857: 这是什么,可能是编辑的问题,赶紧修改下哦^_^ 2012-07-09 10:50:06
1??黑曲霉??黄曲霉和扩展???霉分别接??于茄??瓶,30度培养10天,由于扩展???霉的孢??少,???多???2个茄??瓶进行培养。
2??制备霉???悬液:用??????温的pbs无???水,洗下孢??,收集到???玻璃???的无???三角瓶中,充分打散,用8层无???纱布过滤,滤液??低温高速离心,收集沉淀,并用少??l无???水收集???出沉淀。用血???计数???统计孢??数目,备用。该孢??悬浮液一般?????时使用,在4度冰箱???能??存7天。
3?????抑???圈或最低抑???浓度MIC实验,???????????0.1ml的孢??液混入平???(控制培养基温度,????烫死???)或将孢??液???入指定的液体中就行了。
4??先说到这里,你??看看书,如还有问题,?????问。
2楼2012-07-09 10:47:46
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zjwsw

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
Q-L-?: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-07-09 20:22:30
amisking: 回帖置顶 2012-07-09 21:11:32
1、黑曲霉、黄曲霉和扩展青霉分别接种于茄子瓶中,30度培养7-10天,扩展青霉由于孢子少可多培养2个茄子瓶。
2、孢子悬浮液的制备:用含吐温的PBS无菌水洗下孢子,收集到含玻璃珠的三角瓶中,充分震荡,并用无菌的8岑纱布过滤,滤液经低温高速离心,再用少量无菌水收集沉淀。用血球计数板统计孢子数,备用。一般孢子悬浮液要及时使用,在4度冰箱中保存不超过7天。
3、抑菌圈及最低抑菌浓度MIC实验,只要吸取0.1ml的孢子悬浮液混入平板(注意控制温度不要把菌烫死)或吸取0.1ml的孢子悬浮液到指定的药物浓度中就行,培养几天观察抑菌圈或浑浊度。
4、先说到这里,若做了有其他问题再说。
3楼2012-07-09 11:18:37
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Q-L-?

金虫 (正式写手)

难得糊涂

引用回帖:
4楼: Originally posted by zjwsw at 2012-07-09 11:19:14
1、黑曲霉、黄曲霉和扩展青霉分别接种于茄子瓶中,30度培养7-10天,扩展青霉由于孢子少可多培养2个茄子瓶。
2、孢子悬浮液的制备:用含吐温的PBS无菌水洗下孢子,收集到含玻璃珠的三角瓶中,充分震荡,并用无菌的8 ...

好的,非常感谢
我先做着试试,如有什么问题可能还得麻烦你
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5楼2012-07-09 20:22:17
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Q-L-?

金虫 (正式写手)

难得糊涂

引用回帖:
6楼: Originally posted by 我是co2 at 2012-10-13 11:00:50
你好,请问你做抑菌试验的过程中,几种菌的浓度是不是要控制一样呢?如果是的话,你是如何控制的呢?谢谢。希望得到你的答复,我也是刚接触,好多不懂呢。

我研究的也不是特别深入,大致的理解如下:
一般做抑菌试验所用的细菌或霉菌悬液的浓度都是特定的,要控制浓度的。
一般用于做实验的菌悬液要保证在对数生长期,而浓度是一个评价标准
有人通过测定菌悬液的吸光值来确定浓度
也可以用血球计数板法确定菌悬液浓度后,再通过稀释或继续培养,得到想要的浓度。
你可以搜搜相关的文献看看
祝好运!
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7楼2012-10-14 18:36:57
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匿名

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8楼2012-10-14 22:58:19
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匿名

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9楼2012-11-08 23:36:50
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金蝉

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 我是co2 at 2012-11-08 23:36:50
那请问用生理盐水稀释的菌悬液以及孢子悬液,如何保藏,可以保藏多少天呢?谢谢了。...

生理盐水稀释的在4°冰箱中保存,一般能保存15天左右
10楼2014-12-29 09:39:00
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