应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 基因克隆
51/1返回列表
查看: 1658  |  回复: 15
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)

[求助] 基因克隆

我设计的一对引物，第一次PCR扩增时，发现扩增出来了片段，但个人感觉条带太暗，怕回收不回来，就扔了。第二次做，同样的体系，同样的条件，P出来，连一条条带都没有。而且第一次的让师兄看了，一点都不暗，说是能回收回来的。

请问各位，这是什么原因呢？为什么同样的条件，同样的体系，就是做不出来呢。
回复此楼

» 猜你喜欢
nothing isimpossible
1楼2012-07-03 00:39:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by sd3824289 at 2012-07-03 15:44:06
建议楼主在PCR仪上设计温度梯度！估计是退火温度的问题

我用的是touch-down PCR,按说是没有问题的啊
赞一下 回复此楼
nothing isimpossible
6楼2012-07-03 17:06:32
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-07-03 15:31:22
hraikeyan: 金币+2 2012-07-25 11:20:09
1：第一次P出了条带，请问是就目的条带一条呢，还是有多条条带，如果多条说明引物的特异性不是很好，需要摸条件，如果第一次就P出了一条且是目的条带的话，只是有点暗的话，可以试着加大模板量，增加PCR循环数.
2：最好对模板进行检测，看看是否污染或者浓度是否足够，酶，引物，buff，水之类的东西也得确保没有污染，这些都会不经意中影响PCR，可以一一排除.
祝楼主好运
赞一下 回复此楼
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
2楼2012-07-03 10:20:26
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Marado at 2012-07-03 10:20:26
1：第一次P出了条带，请问是就目的条带一条呢，还是有多条条带，如果多条说明引物的特异性不是很好，需要摸条件，如果第一次就P出了一条且是目的条带的话，只是有点暗的话，可以试着加大模板量，增加PCR循环数.
2： ...

请问模板怎么检测？是要做电泳吗？
赞一下 回复此楼
nothing isimpossible
3楼2012-07-03 12:22:42
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by hraikeyan at 2012-07-03 12:22:42
请问模板怎么检测？是要做电泳吗？...

可以做个电泳看一下模板是否被污染，然后DNA浓度可以用分光光度计测量A260/280，如果在1.7-2.0之间，DNA可被认为是比较纯的.
赞一下 回复此楼
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
4楼2012-07-03 13:14:49
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭