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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 高手帮我看下这个峰该怎么分开
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basa19
zxz.1982: 违规存档, 专业版，禁止表情帖，还望谅解，违规存档暂不扣金币 2012-07-17 20:30:01
21楼2012-07-02 18:47:43
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dandanxiong1983

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
18楼: Originally posted by guevara1967 at 2012-07-02 17:36:04
首先一点怀疑，RUTIN和QUERCETIN-3-GLUCOSIDE分子差一个糖，不应该跑到一块去，你再检查一下你的标样，确认无误后再分别用条件1进一针单标

其次，条件1的A相换成纯水相，甲酸
三、条件2的有机相中也加上酸
四、 ...

您说的条件1的A相换成纯水相，甲酸，这样其实起不到更缓慢增加梯度的效果，个人感觉，因为这些个物质实在结构都太相近，最开始选方法的时候我就是考虑这点才没有直接利用甲醇-水系统，反倒想在条件2上将有机相变为ACN-WATER系统以其缓慢增加其梯度...
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22楼2012-07-02 18:56:27
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dandanxiong1983

金虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by guevara1967 at 2012-07-02 17:36:04
首先一点怀疑，RUTIN和QUERCETIN-3-GLUCOSIDE分子差一个糖，不应该跑到一块去，你再检查一下你的标样，确认无误后再分别用条件1进一针单标

其次，条件1的A相换成纯水相，甲酸
三、条件2的有机相中也加上酸
四、 ...

建议三中有机相加入酸有什么特别的道理吗？
四可以试一下，谢谢！
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23楼2012-07-02 18:57:30
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lzjessie_wlf

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
soundhorizo: 金币+5, 感谢您的应助，欢迎常来分析版交流指导 ^^ 2012-07-02 23:33:22
dandanxiong1983: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-07-17 19:48:11
引用回帖:
23楼: Originally posted by dandanxiong1983 at 2012-07-02 18:57:30
建议三中有机相加入酸有什么特别的道理吗？
四可以试一下，谢谢！...

如果楼主倾向于使用条件1，那么可以对条件1加以修改。A 相改为18ACN+82H2O+0.25%HCOOH, B 相为MeOH.
这样就可以在使用到下列分离 条件的同时,
15        18        82        rutin, q3 separated
又最大限度的保持后续使用甲醇，水分离其他七个化合物的条件。

请教楼主，为什么不是水相和有机相中同时加酸？
一般来说，两相同时加等量酸，可以降低在梯度洗脱时酸度对洗脱的影响。

如果楼主可以列出其他七个化合物在这个两个流动相条件下的分别出峰时间(retention time)，那么就更有利于理论上推段流动相的梯度分布。

当然，最后的流动相条件还需要实践来证明。

如果知道梯度的延迟时间，楼主还可以使用等梯度洗脱，大致推断出每个化合物大致洗脱出来的梯度。

粘贴一个网址给楼主，希望有所帮助。
如果网址不能打开，那么后面粘贴的一段希望对楼主有帮助。

http://www.ionsource.com/tutorial/chromatography/rphplc.htm
Optimizing the Separation


Once you have a separation you may want to optimize it.  You may wish to shallow out the gradient to improve the separation, or you may wish to shorten the run time.  Taking the illustration above one can see that all of the peptides are out by 40 minutes.  This does not mean that we can change this 80 min run into a 40 min run, but there is room for improvement.  The first step in the optimization is to determine the %B at which the last peak elutes.  If you look at the blue gradient line you might guess that the last peak elutes near 40%B but this would be incorrect.  All HPLC systems have a gradient delay.  The gradient delay is the time between when the software tells the pumps to start pumping at a certain mobile phase composition and the time it takes for that solvent composition to reach the column and have an effect.  A good guess for a gradient delay is 10 minutes.  This would mean that our guess for the final mobile phase composition for the 40 min peak would be approximately 30%B.  To observe the gradient delay time look at the illustration above and observe that the baseline returns to the starting conditions at 70 minutes and not at 60.1 minutes when our pumps have gone back to 2% B.  One must take care to avoid having the last peak elute on the "equilibration cliff", (at 70 min. in this example).  This can be avoided by ending the gradient at a %B that is slightly higher than that required by the last component.

Based on the separation shown at the top of this section one could rewrite the gradient to look like this:


This would make the gradient shallower and possibly give a better peak separation.  To shorten the run time one could rewrite the gradient to look like this:


This last change would cut 30 min. from the analysis time.  Shorter analysis times are always better for work efficiency.  With every minute you can cut from the HPLC method without sacrificing your chromatographic goals you will be rewarded with better work efficiency. With this change the last peak would most likely still elute at 40 minutes and the peptide separation would essentially remain the same as in the initial 60/60 analysis.
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24楼2012-07-02 23:08:45
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guevara1967

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
zxz.1982: 金币+1, 感谢交流，欢迎常来 2012-07-17 20:30:33
引用回帖:
23楼: Originally posted by dandanxiong1983 at 2012-07-02 18:57:30
建议三中有机相加入酸有什么特别的道理吗？
四可以试一下，谢谢！...

有的化合物的分离对酸度敏感，所以再有机相加酸，保持梯度变化时整个流动相体系的酸度不变

条件1是甲醇，条件2是乙腈为有机相，各有优劣，把有机相改为甲醇-乙腈的混合相，可能会有好结果，我曾经遇到过这样的情况，单纯甲醇、或乙腈都不行，甲醇-乙腈1-1就可以了，试试看吧
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梦想、激情、灵感、体验--che
25楼2012-07-03 08:14:25
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liu2011

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
soundhorizo: 金币+1, 感谢应助 欢迎常来分析版交流指导^^ 2012-07-03 18:55:59
甲酸的浓度增大会有增加分离度的效果
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26楼2012-07-03 08:49:40
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fansfly123

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
soundhorizo: 金币+2, 感谢应助 欢迎常来分析版交流指导^^ 2012-07-03 18:55:37
dandanxiong1983: 金币+5, ★有帮助 2012-07-17 19:48:32
1.水相里面不要加入有机溶剂，
2.水相中甲酸不行，可以改成三氟乙酸，如果不行，可以加0.1%氨水，前提条件是在色谱柱耐受的PH值范围之内，
3.改成等度洗脱，
4.你的色谱条件中没看到你的流速，流速也是可以优化达到最佳的，
5.用的什么色谱柱？注意色谱柱的匹配，结果不好的话需要更换色谱柱再进行试验
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27楼2012-07-03 11:44:00
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dandanxiong1983

金虫 (小有名气)
★
zxz.1982: 金币+1, 感谢交流，这种方法是可行的，有时候有事半功倍的效果 2012-07-17 20:31:19
soundhorizo: 回帖置顶 2012-07-17 21:25:22
对于上次问的这个问题，跑去问了前辈，关于isomer分不开该怎么办，他提供了很好的思路，就是梯度是，可以不一味的按顺序加大洗脱能力，可以在难分开的位置，适当减小其洗脱能力，将有机相比例再次变小。不知道这么说，大家是否能理解，按照这个思路，我分开了，虽然不是特别理想，但比之前试过的方法都好很多。但愿能帮助到大家！
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28楼2012-07-17 19:51:46
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lzjessie_wlf

金虫 (小有名气)
引用回帖:
28楼: Originally posted by dandanxiong1983 at 2012-07-17 19:51:46
对于上次问的这个问题，跑去问了前辈，关于isomer分不开该怎么办，他提供了很好的思路，就是梯度是，可以不一味的按顺序加大洗脱能力，可以在难分开的位置，适当减小其洗脱能力，将有机相比例再次变小。不知道这么说 ...

祝贺。
  谢谢。很好理解。
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29楼2012-07-17 20:48:55
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同手同脚1234

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
29楼: Originally posted by lzjessie_wlf at 2012-07-17 20:48:55
祝贺。
  谢谢。很好理解。...

谢谢 很好理解 我也遇到同样的问题了 两个物质也是相差一个糖 同一时间出峰 分不开 看了你的思路让我也一些思路 我试试呀 谢谢
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30楼2018-06-25 11:02:07
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